促紅細(xì)胞生成素抑制大鼠創(chuàng)傷性腦水腫形成☆

唐兆華 霍鋼 孫曉川 劉自力 廖正步 陳飛蘭 王文濤 鄭履平 楊剛○☆

創(chuàng)傷性腦水腫是顱腦損傷最重要的繼發(fā)性腦損害，嚴(yán)重的創(chuàng)傷性腦水腫可導(dǎo)致患者出現(xiàn)不可逆性或致死性腦損害，其分子機(jī)制的研究和臨床防治一直都是神經(jīng)外科領(lǐng)域的難題。國(guó)內(nèi)外及本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）在神經(jīng)系統(tǒng)中具有減輕腦水腫的神經(jīng)保護(hù)功能[1],但其分子機(jī)制尚不明確。細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶 （extracellular regulated protein kinases，ERK）作為EPO的下游信號(hào)通路之一，在顱腦損傷病情發(fā)展過(guò)程中具有重要作用[2]。水通道蛋白4（aquaporin 4，AQP4）是腦組織中分布最重要的跨膜水分子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其異常的過(guò)度表達(dá)可致腦內(nèi)水電解質(zhì)失衡，導(dǎo)致腦水腫加重[3]。本研究擬通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)探討參與EPO抑制創(chuàng)傷性腦水腫的潛在分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的90只健康成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量200～260 g，符合國(guó)家二級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。SD大鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)組、創(chuàng)傷組和EPO組，每組30只。假手術(shù)組：只在顱骨上做一個(gè)直徑約為4 mm的骨窗，不作腦創(chuàng)傷。創(chuàng)傷組：制作改進(jìn)式Feeney's創(chuàng)傷性腦損傷模型。EPO組：成功制作Feeney's腦損傷后1 h及每隔24 h時(shí)，給大鼠腹腔注射rhEPO（5000 UI/kg）。所有動(dòng)物的處理符合重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)有關(guān)規(guī)定。p-ERK1/2多克隆抗體及ERK1/2多克隆抗體購(gòu)置于Cell Signaling公司，AQP4及 β-actin多克隆抗體購(gòu)置于 Santa Cruz公司。

1.2 制作大鼠腦創(chuàng)傷模型 采用改良Feeney's硬膜外撞擊法制作大鼠腦創(chuàng)傷模型[4]。于傷后1 d、3 d和5 d，檢測(cè)各組大鼠行為學(xué)評(píng)分。創(chuàng)傷后72 h，檢測(cè)各組大鼠腦組織含水量情況，腦組織磷酸化ERK（phosph orylated ERK，p-ERK）、AQP4 mRNA 與AQP4蛋白的表達(dá)?！?br>