檸檬苦素調(diào)控Tiam1基因表達(dá)影響人體血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞VEGF/VEGFR2通路及誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制研究①

李立佳 符梅竹 黃惠敏 鄭詩華 閻青青 張曉鈿

(海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科，海口 570102)

血管瘤是嬰幼兒常見的良性腫瘤，多發(fā)于面頸部、四肢、口腔黏膜、肌肉、肝臟等[1]。隨著年齡逐漸增長，部分患兒的血管瘤可自行消退，而另外一部分患兒的血管瘤則不斷增殖，影響患兒的外貌和身心健康[2]。當(dāng)前，血管瘤通常采用激光手術(shù)和藥物等方式進(jìn)行治療，而其發(fā)病和消退機(jī)制尚不完全清楚。

Toonaciliatin A是一種檸檬苦素類似物，研究發(fā)現(xiàn)其能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[3,4]。T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)基因(T lymphoma invasion and metastasis inducing gene 1,Tiam1)是從小鼠T淋巴瘤細(xì)胞系中克隆出來的，在人類多種腫瘤細(xì)胞系中異常表達(dá)，與細(xì)胞的增殖、凋亡等過程密切相關(guān)[5-7]。研究發(fā)現(xiàn)，Tiam1在血管瘤增生期表達(dá)上調(diào)，與血管瘤增殖有關(guān)[8]。VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在血管瘤發(fā)展中發(fā)揮作用，血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和其受體VEGFR2在此通路中起重要作用[9]。VEGF及其受體在增生期的血管瘤標(biāo)本中表達(dá)顯著上調(diào)，與血管瘤的增殖密切相關(guān)[10]。

本課題以分離所得的血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞(hemangioma-derived endothelial cells,HemEC)為研究對象，采用不同濃度檸檬苦素類似物Toonaciliatin A處理HemEC，研究Toonaciliatin A對HemEC細(xì)胞增殖和凋亡的影響，及Tiam1基因和VEGF信號通路在此機(jī)制中的作用。

1 材料與方法

1.1材料 人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞(HemEC)由分離所得；RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)購自Gibco公司，檸檬苦素類似物Toonaciliatin A購自上海詩丹德生物技術(shù)有限公司；pcDNA-Tiam1質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)組連接后測序驗(yàn)證；雙抗、兔抗人第Ⅷ凝血因子抗體抗原、抗Tiam1抗體、抗VEGF抗體、抗VEGFR2抗體和抗β-actin抗體購自Abcam公司；……