活細胞標記和流式細胞術應用于體外檢測巨噬細胞吞噬活性的方法建立①

王佳佳 王 磊 宋興輝 李艷偉 郭 春 黃瑩瑩 劉 麗

(浙江大學醫學院公共技術平臺,杭州 310058)

巨噬細胞發揮吞噬功能對實現機體的天然免疫防御和維持內環境穩定是至關重要的[1-3]。人們在研究巨噬細胞的吞噬活性即其對顆粒物的攝取時，以往常用方法有顯微鏡觀察和計數或流式細胞術檢測被吞噬顆粒標記的熒光素信號確定單個樣本的吞噬率[4-6]。

然而多項研究表明，巨噬細胞對待吞噬顆粒的吞噬功能與兩者作用比例相關[7，8]，即在巨噬細胞發生吞噬作用時，巨噬細胞和待吞噬顆粒物比例直接影響吞噬率的結果，對于經過體外特定處理的巨噬細胞，如經IFN-γ刺激或者RNA干擾特定基因等，常會出現細胞量與對照組的不一致。在此情況下，比較特定處理對吞噬功能的影響時，經處理的巨噬細胞和對照巨噬細胞需進行細胞計數，調整巨噬細胞和待吞噬顆粒物比例一致，方可后續試驗。該步驟必不可少，卻存在細胞計數不準確和嚴重耗時的問題，直接影響巨噬細胞的活性和吞噬率結果的準確性。

因此，對體外巨噬細胞吞噬活性的研究來說，保證樣本和對照細胞在一樣的環境體系下完成吞噬過程，結果既準確又可靠就顯得非常必要。本研究旨在通過活細胞標記和流式細胞術的聯合應用，建立一種簡便可靠的方法研究體外巨噬細胞的吞噬活性。

1 材料與方法

1.1材料 小鼠巨噬細胞RAW264.7來自實驗室保種細胞； Cell TraceTMCFSE Cell Proliferation Kit(no.C34570)購自Invitrogen公司；DMEM培養基為Hyclone產品；胎牛血清和胰酶Trypsin-EDTA購自Gibco公司；……