通心絡對腦缺血再灌注大鼠TLR4和NF-κB表達的影響①

李佳佳 朱云波 康玲伶 朱 江

(承德醫學院附屬醫院神經內科，承德 067000)

缺血性腦卒中是危害人類健康的高發病之一，目前缺血性腦卒中的發病機制尚未明了，但研究表明，炎癥反應參與缺血性腦卒中的發生與發展，Toll樣受體4 (Toll-like receptor 4，TLR4) 通過介導核轉錄因子(nuclear factor-κB，NF-κB)的激活，促進其下游炎癥因子IL-6、IL-1β及TNF-α等的表達，從而放大炎癥信號[1,2]。通心絡是有脈絡學說指導組方的中成藥，具有活血通絡、搜風解痙的功效，是臨床上治療冠心病和缺血性腦卒中的主要用藥，大量文獻報道通心絡可通過保護血管及神經損傷治療缺血性腦卒中[3,4]，但通心絡能否介導TLR4/NF-κB通路對缺血性腦卒中產生療效尚未報道。故本文旨在建立大鼠腦缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion，I/R)模型，觀察不同劑量通心絡的藥效及具體效用機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 健康雄性SD大鼠50只，4月齡，體質量(300±20)g，由武漢華聯科生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK(鄂)2018-0028，飼養于清潔級動物房中，自由攝食飲水，適應性喂養7 d后用于后續試驗中。

1.1.2試劑與儀器 通心絡(石家莊以嶺藥業股份有限公司，國藥準字：Z19989915)，尼莫地平(山東新華制藥股份有限公司，國藥準字：H10910080)，TUNEL試劑盒(Roche公司)，IL-6、IL-1β及TNF-αELISA試劑盒(美國R&D公司)，Caspase-3、TLR4、p65、p-p65及β-Actin抗體(美國Sigma-Aldrich公司)，HRP標記的山羊抗兔二抗或小鼠二抗(美國Santa Cruz公司)；JS-1075化學發光全自動化學發光圖像分析系統(上海培清科技有限公司)；GRME-LUX2-3L光學顯微鏡(日本Kyowa公司)。

1.2方法

1.2.1模型制備 采用改良Longa法[5]建立腦缺血再灌注模型，腹腔注射10%的水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定；小心開腦，分離出右側頸總動脈、頸內動脈及頸外動脈，結扎頸總動脈和頸外動脈根部，于頸總動脈靠近分叉口處開孔后插入線栓，從頸總動脈通過頸內動脈一直插入到大腦中動脈處；……