雞γ干擾素與補體C3d主要片段的串聯(lián)表達及活性測定①

牛明福 范逸文 杜夢璇 鮑永毅 宮 強 侯 穎

(河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院/河南省食品微生物生物工程技術(shù)中心,洛陽 471023)

干擾素(interferon，IFN)是一種具有廣譜抗病毒活性的蛋白[1]，具有抵抗感染和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性[2]。雞IFN-γ(chicken IFNγ，chIFN-γ)是由Sekellick等[3]從有絲分裂原刺激的雞脾淋巴細胞中發(fā)現(xiàn)的，隨后Digby 等[4]也成功克隆了chIFN-γ基因，進一步研究發(fā)現(xiàn)，chIFN-γ具有與哺乳動物一樣的免疫功能[5-8]，且具有疫苗佐劑效果。補體C3分子是補體三條激活途徑中的樞紐，是機體防御機制中的關(guān)鍵分子。C3d是C3分子的裂解片段，研究發(fā)現(xiàn)C3d可以與CD21的結(jié)合位點存在，使其能夠發(fā)揮分子佐劑的作用從而在抗原誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，不僅可以增強機體的初次免疫應(yīng)答，且對再次免疫應(yīng)答也具有良好的增強作用[9-12]。新型疫苗的研發(fā)離不開良好的疫苗佐劑的輔助，干擾素和補體分子單獨作為免疫佐劑時具有良好的佐劑效應(yīng)，而免疫細胞表面同時存在干擾素和補體分子的受體，本實驗將干擾素與補體分子串聯(lián)表達，研究其在雞胚內(nèi)的抗病毒活性，并作為雞DNA疫苗的佐劑共同免疫，觀察其作為免疫佐劑的效應(yīng)，為疫苗佐劑的研發(fā)提供新方向。

1 材料與方法

1.1材料E.coliBL21、表達載體pET29a(+)、雞新城疫病毒(NDV)均由本實驗室保存；海蘭白殼種蛋和一日齡小雞購自洛陽公華禽業(yè)公司；限制酶、T4 DNA連接酶、Taq酶等均購自TaKaRa公司；其余試劑購自上海生工生物工程有限公司；pcDNA3.1-HA質(zhì)粒為本實驗構(gòu)建并保存。

1.2方法

1.2.1目的……