建立聯合檢測人附睪蛋白4、糖類抗原15-3熒光層析方法①

王云龍 李 果 李玉林 王繼創 程 蕾 張怡青

(河南師范大學生命科學學院，新鄉 453002)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率逐年升高，并呈年輕化趨勢[1]。早診斷、早發現，對乳腺癌患者及時進行有效的治療和預后具有重要意義。2007年美國臨床腫瘤學會將血清糖蛋白抗原CA15-3(breast cancer antigen,CA15-3)推薦為初級治療后乳腺癌患者的篩查、診斷、分期或常規監測的一種重要腫瘤標志物[2]，王燕敏等[3]的研究表明CA15-3的特異性為75%，敏感性為55.89%，其特異性及敏感性都不太理想。周巖等[4]、魏蓉[5]的研究結果顯示人附睪蛋白4 (human epididymis protein 4，HE4)在正常細胞中低表達，而在乳腺癌細胞系中呈高表達。乳腺癌患者和乳腺良性腫瘤患者血清HE4水平與血清CA15-3水平均呈正相關[6-8]，HE4和CA15-3聯合檢測有助于乳腺癌的輔助診斷[6,9-13]，其檢出率可高達92.5%[6]，明顯提高乳腺癌臨床診斷的效果，HE4與CA15-3聯合檢測能夠更好地指示乳腺癌的發展變化。聯合檢測成為近年來研究的熱點，但臨床上未見CA15-3與HE4聯合檢測熒光免疫層析的產品，本研究初步建立了聯合檢測HE4、CA15-3熒光免疫層析的方法。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗材料 PVC板購自上海良信生物科技有限公司，吸水紙、玻璃纖維棉購自通城印刷廠，硝酸纖維素膜(CN-140)購自德國Sartorius，基質血清、臨床定值血清樣本由河南省生物工程技術研究中心提供。

1.1.2試劑 碳化二亞胺(EDC)購自生工生物工程(上海)有限公司，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)購自深圳海王英特龍生物有限公司，羧基修飾時間分辨熒光微球(固含量1%)、HE4配對單克隆抗體、CA15-3配對單克……