重組小鼠IL-36α成熟肽制備及其在IBD中作用的初步研究①

富文達 朱俊豐 喬 麗 孫 遜

(中國醫科大學免疫學教研室，沈陽 110122)

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一種反復發作的慢性腸道炎癥性疾病，根據臨床表現可以分為潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn′s disease，CD)[1]。IL-1家族在IBD發病中發揮重要的免疫調控作用[2]。IL-36亞家族包括IL-36α(IL-1F6)、IL-36β(IL-1F8)、IL-36γ(IL-1F9)和IL-36Ra(IL-1F5)，是新近發現的IL-1家族成員[3]。IL-36α廣泛表達于角質細胞、上皮細胞、樹突狀細胞以及巨噬細胞中，提示IL-36α在相關組織的穩態和炎癥中發揮重要作用[4,5]。小鼠IL-36α基因共編碼160個氨基酸(Met-1-His-160)，分子量約為17 kD。已有研究證明，在N端去除短結構域形成的IL-36α成熟肽(Arg-8-His-160)可以將IL-36α全蛋白的活性提高多達1 000倍[6]。目前關于IL-36α在IBD中的作用研究還處于起步階段，在臨床IBD患者腸組織和小鼠IBD模型腸黏膜中，IL-36α的表達水平顯著升高[7,8]，提示IL-36α可能在IBD發病中發揮作用。目前，還未有關于重組小鼠IL-36α成熟肽制備及應用的相關報道，本研究利用原核表達的方法制備小鼠IL-36α成熟肽，并對其在IBD發病中的作用進行初步研究，為進一步研究IL-36的腸道黏膜免疫應答調節機制奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1材料 質粒pET28a(+)、大腸埃希菌(Escheri-chia coli)BL21(DE3)由中國醫科大學免疫教研室保存。小鼠IL-36α成熟肽基因委托武漢金開瑞生物工程有限公司優化合成。C57BL/6雄性小鼠(6～8周，SPF級)購于北京維通利華有限公司。DNA Maker、2×Pfu master Mix、T4DNA連接酶、瓊脂糖電泳回收試劑盒、IPTG、卡那霉素、Ni-Aganose His標簽蛋白純化試劑盒購自北京康為世紀生物科技有限公司、ToxinEraserTM內毒素去除試劑盒、ToxinSensorTM顯色法LAL內毒素檢測試劑盒購自南京金斯瑞生物科技有限公司、小鼠抗His-Tag單克隆抗體購自武漢愛博泰克生物科技有限公司、DSS購自美國MP Biomedicals公司。……