土木香提取物通過下調miR-31-5p表達調控宮頸癌細胞增殖和凋亡的機制研究

韓一栩 周小飛 陳春妃 方秋滿 王發輝 鄧青春

(海南醫學院第二附屬醫院婦科，海口 570311)

宮頸癌是全球第四大常見的女性惡性腫瘤，每年約有25萬人因此死亡[1]。大多宮頸癌患者確診時已是晚期，主要治療方案可能包括手術或同步放化療方案，患者預后較差，負擔重。中藥可輔助放化療提高臨床效果，減輕副反應，提高患者生存質量，延長患者生存期[2]。

土木香(inula helenium L.)是菊科旋覆花屬植物土木香的根，具有抑菌和抗腫瘤活性[3]。研究表明，土木香提取物(inula helenium L.ethyl acetate extract，EEIHL)可抑制胰腺癌細胞增殖和遷移并誘導細胞凋亡[4]；土木香內酯可抑制卵巢癌細胞生長和促進細胞凋亡，阻滯G2/M細胞周期[5]。但土木香提取物抗腫瘤的作用機制尚不清楚。研究表明，白藜蘆醇可通過下調miR-31-5p抑制腸癌細胞增殖[6]；而miR-31在宮頸癌患者血漿中高表達，其可促進宮頸癌HeLa細胞的增殖和遷移[7]。因此，本研究假設土木香提取物通過下調miR-31-5p表達調控宮頸癌細胞的增殖和凋亡。

本課題以人宮頸癌細胞系HeLa為研究對象，研究土木香乙酸乙酯提取物EEIHL對宮頸癌細胞增殖和凋亡的影響，并對假設進行驗證。

1 材料與方法

1.1材料 人宮頸癌細胞株HeLa購自美國模式菌種收集中心(American Type Culture Collection，ATCC)；土木香藥材購自中藥批發市場，經本院中藥師鑒定為土木香(inula helenium L.)根；牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、胰蛋白酶Trypsin、二甲基亞礬(Dimethyl sulfoxide,DMSO)和四氮唑藍(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,MTT)購自Sigma-Aldrich公司；RPMI1640培養基和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)購自美國Gibco公司；引物、miR-31-5p模擬物(miR-31-5p)、miR-31-5p抑制劑(anti-miR-31-5p)和對照(miR-con和anti-miR-con)購自上海吉瑪制藥有限公司；Lipofectamine 2000轉染試劑、RNA提取試劑Trizol、real-time PCR 試劑盒、反轉錄試劑盒(RT-PCR)購自美國Invitrogen公司；……