缺氧誘導因子-1α、生長素基因沉默對CNE-2鼻咽癌細胞放療及凋亡敏感性的影響

徐茂林 陳曉華 孫 波

(淄博市第一醫院耳鼻咽喉科，淄博255200)

鼻咽癌是我國廣州等南方地區最常見的惡性腫瘤之一，因其主要定位于鼻咽腔頂部和側壁，放療成為了其最主要的治療手段[1]。隨著放療技術及方案的改進，患者的生存率有了明顯提高，但隨著治療的進展，部分患者對放射治療出現抵抗，最終導致治療失敗[2,3]。生物細胞對電離輻射的反應性受多種因素影響，其中，乏氧細胞比例、細胞凋亡調控是關鍵因素[4]。缺氧誘導因子-1(HIF-1)在腫瘤微環境中發揮著重要作用，參與了腫瘤進展、血管生成等多個環節[5]。生存素(Survivin)是一種高效能的凋亡抑制因子，可通過抑制Caspase 活性而發揮作用[6]。有研究表明，HIF-1α、Survivin的表達與患者預后相關，但機制尚不明確。

1 材料與方法

1.1材料 鼻咽癌細胞株CNE-2購于武漢博士德生物科技公司。質粒大提試劑、DH5et大腸桿菌感受態細胞購于美國Invitrogen公司，逆轉錄試劑盒、RT-PCR試劑盒購于TaKaRa公司(大連)，miRNA干擾質粒由武漢博士德生物科技公司合成構建。兔抗人HIF-1α單克隆抗體、兔抗人Survivin單克隆抗體購于Abcam公司(英國)。35只4～6周齡BALB/C-nu/nu雌性裸鼠，購自武漢大學動物實驗中心。

1.2方法

1.2.1細胞培養及質粒轉染 細胞CNE-2在37℃，5%CO2條件恒溫培養箱中培養，每2 d傳代1次。制備CNE-2單細胞懸液，接種，貼壁培養后轉染，6 h后更換培養基，繼續培養48 h，熒光顯微鏡下計算轉染率；根據轉染質粒不同，將CNE-2細胞分為HIF-1α干擾組、Survivin干擾組、聯合干擾組、空載組及陰性對照組。

1.2.2小鼠移植瘤模型構建及X射線照射 將35只裸鼠隨機均分為5組，在右腋皮下注射CNE-2細胞(0.2 ml，1.5×1010L-1)，密切觀察裸鼠精神狀態、活動狀況及成瘤情況等。……