煙草提取物對牙周炎小鼠Th17/Treg細胞免疫平衡及相關轉錄因子表達的影響

吳 琳

(浙江特殊教育職業學院，杭州310023)

牙周炎屬于臨床常見慢性口腔炎癥疾病，調查顯示，牙周炎發病率高達70%，若不及時治療則會發展為牙齦炎、牙槽骨吸收甚至牙齒脫落，嚴重影響患者日常生活[1]。煙草中含有尼古丁、乙醛及丙醛等多類有害物質，研究發現煙草中有害物質可導致牙槽骨吸收，是引發牙周炎、種植體失敗的主要原因[2]。牙菌斑生物膜是導致牙周炎的重要起因，目前多數研究認為牙周組織炎性反應及免疫應答與牙周炎的發生發展密切相關[3]。Wang等[4]研究認為輔助性T細胞17(T helper cell 17,Th17)、調節性T細胞(Regulatory T cells,Treg)比例失衡所導致的自身免疫反應是導致牙周炎發生的重要原因。然而煙草是否影響牙周炎所引發的免疫失衡，目前尚不明確。本研究通過制備牙周炎小鼠，給予煙草提取物(Cigarette smoke extraction,CSE)處理，以觀察CSE對牙周炎小鼠Th17/Treg細胞免疫平衡的影響，以期為牙周炎的發病機制研究提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗菌株以及動物 P.gingivalis 菌株購于上海北諾生物科技有限公司，置于BHI血瓊脂培養基，放置37℃、5%CO2培養箱中培養。SPF級BALB/cJ小鼠，6周齡，60只，體重29～33 g,由河南省實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(豫)2017-0004。小鼠均在22～25℃室溫、50%～60%濕度、12 h光照、無致病菌環境中統一飼養，室內保持通風良好，小鼠自由飲水、攝食，飼養1周后用于模型制備。

1.1.2試劑與儀器 BHI固體、液體培養基、Ⅳ型膠原酶(Sigma,美國)；兔抗鼠白介素-17(Interleukins-17，IL-17)、視黃酸相關孤兒受體(Retinoid-related orphan receptors,RORγt)、IL-10、又頭框轉錄因子P3(Forkhead box P3,FoxP3)(Abcam，英國)；β-actin、山羊抗兔HRP標記IgG抗體(CST，美國)；封閉液(Gibco，美國)；PVDF膜、亞甲基藍(索萊寶，中國北京)；蛋白提取試劑盒(Omega，美國)；……