miR-3168靶向PDCD5調控A549細胞凋亡①

燕國麗 胡作為 成薇婷

(武漢市第一醫(yī)院腫瘤科，武漢430000)

肺癌仍然是全球癌癥死亡的首要原因[1]，其是導致男性癌癥死亡的主要原因，也是女性癌癥死亡的第二大原因[2]。有研究顯示，相比于正常人群，miR-3168 在肺癌患者中表達上調[3]。但是miR-3168表達上調的原因和其導致的結果的分子機制目前尚無研究。已經(jīng)在多種人類腫瘤中發(fā)現(xiàn)程序性細胞死亡因子5(Programmed cell death 5,PDCD5)的表達降低，例如乳腺癌、肝細胞癌、肺癌、胃癌、慢性髓性白血病、星形細胞膠質瘤、軟骨肉瘤、喉鱗狀細胞癌和卵巢癌[4]。最近的研究顯示腫瘤抑制因子PDCD5在p53介導的細胞凋亡中起積極作用[5]，當細胞DNA被破壞時，PDCD5與Tip60形成復合物，其從胞質溶膠轉移至細胞核，通過Lys-120處的p53乙酰化促進DNA損傷反應[6]。此外，PDCD5與BAX相互作用以介導細胞色素C釋放[4]。另一方面，PDCD5的抑制或敲低都會減弱癌細胞的凋亡[7]。盡管PDCD5明顯作為p53介導的細胞凋亡的正調節(jié)因子，但PDCD5在細胞凋亡過程中的調節(jié)方式尚不清楚。基于此，本研究旨在探討miR-3168通過調節(jié)PDCD5對非小細胞肺癌A549細胞凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1材料 pmiR-RB-Report質粒購自廣州市銳博生物科技有限公司(貨號：GUR100013-P-2)。PDCD5、P21、BAK、P53、BCL-2、TUBULIN抗體購自Abcam公司(貨號：ab83958、ab109520、ab32371、ab32503、ab32124、ab210797)。H3抗體購自CST公司(貨號：4499)。A549細胞購自上海信裕生物科技有限公司(貨號：AD0202)。RPMI1640培養(yǎng)基購自GE health公司(貨號：SH30091)，胎牛血清購自Thermo Fisher Scientific公司(貨號：10099-133)。蛋白酶抑制劑Cocktail (不含EDTA,mini片劑) 購自Bimake公司(貨號：B14011)。Etoposide(ET)購自SELLECK公司(貨號：S1225)。PBS購自生工生物工程(上海)股份有限公司(貨號：E607008)。青鏈霉素混合液(×100)購自北京索萊寶科技有限公司(貨號：P1400)。ClonExpress Ⅱ One Step Cloning試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司(貨號：C112-01/02)。……