新會陳皮質量控制研究

張懷 陳明權 農根林 何風雷 覃仁安

[摘要] 目的 建立新會陳皮質量控制方法。 方法 高效液相色譜法（HPLC）色譜條件為Atlantis T3-C18色譜柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.5%醋酸水系統，以流速1.0 mL/min進行梯度洗脫。檢測波長為283 nm和330 nm，測定46批次不同產地、不同采收時間、不同陳化時間新會陳皮的橙皮苷、川陳皮素、橘皮素含量。計算比值范圍，并對陳化年份和3種化合物含量進行Pearson相關性分析。 結果 橙皮苷含量≥2.56%，川陳皮素含量≥0.27%，橘皮素含量≥0.18%，3種黃酮類化合物含量的比值范圍為100∶（7.58～22.09）∶（4.89～14.55）。陳化年份和橙皮苷、川陳皮素之間沒有相關性，陳化年份和橘皮素呈負相關（r = -0.345，P < 0.05）;橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三者含量之間存在正相關性（r = 0.544、0.581、0.873，均P < 0.01）。 結論 這3種化合物的限量標準及比值范圍能有效地控制新會陳皮的質量。

[關鍵詞] 新會陳皮;質量控制;橙皮苷;川陳皮素;橘皮素

[中圖分類號] R284.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）07（c）-0120-05

Quality control research of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium

ZHANG Huai? ?CHEN Mingquan? ?NONG Genlin? ?HE Fenglei? ?QIN Ren′an

Guangzhou Baiyunshan Chenliji Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guangdong Province， Guangzhou? ?510288， China

[Abstract] Objective To establish the quality control method of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium. Methods The chromatographic conditions of high performance liquid chromatography （HPLC） were Atlantis T3-C18 column （4.6 mm × 250.0 mm， 5 μm）， and mobile phase was acetonitrile-0.5% acetic acid water system， gradient elution was at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 283 nm and 330 nm. The contents of hesperidin， nobiletin and tangeretin in 46 batches of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium with different origins， different harvesting time and different aging time were detected. The ratio range was calculated. Pearson correlation analysis was performed on the aged years and the contents of the three compounds. Results The hesperidin content was not less than 2.56%， the nobiletin content was not less than 0.27%， and the tangeretin content was not less than 0.18%， and the ratio range of the three flavonoids was 100∶（7.58-22.09）∶（4.89-14.55）. There was no correlation between the aging of aging and hesperidin or nobiletin. The age of aging was negatively correlated with hesperidin （r = -0.345， P < 0.05）; there was a positive correlation among hesperidin， nobiletin and tangeretin （r = 0.544， 0.581， 0.873， all P < 0.01）. Conclusion The limited standards and ratio ranges of these three compounds could control the quality of Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium effectively.

[Key words] Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium; Quality control; Hesperidin; Nobiletin; Tangeretin

陳皮（Citri Reticulatae Pericarpium）為蕓香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，用于脘腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多等癥狀[1]。藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”[2]，廣陳皮是茶枝柑Citrus reticulata ‘Chachi的干燥成熟果皮，主要產于廣東新會，以新會陳皮為道地藥材。陳皮中含有黃酮[3-5]、多糖[6-8]、揮發油[9-11]等，其黃酮類成分有2個類型：一類是黃酮苷類成分，如橙皮苷、柚皮苷等;另一類是多氧甲基黃酮類，主要有川陳皮素、橘皮素、3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黃酮等[12-15]。現代藥理作用和臨床研究表明，陳皮黃酮有抗氧化、抗腫瘤、抗炎等生理作用[16-19]。《中華人民共和國藥典》（2015版，以下簡稱《中國藥典》）中以橙皮苷含量不得少于3.5%作為陳皮質量控制指標。本研究及文獻資料中發現，部分新會陳皮橙皮苷含量達不到《中國藥典》標準，但質量優于其他產地陳皮，然而只測定橙皮苷含量無法全面反映新會陳皮的質量標準。因此，本研究選取黃酮類成分中含量較多的橙皮苷、川陳皮素、橘皮素作為指標，對46批不同產地、不同采收時間、不同陳化年份的新會陳皮藥材進行測定。初步制訂3種指標性成分的含量范圍及比例范圍，并對其陳化年份和3種化合物含量之間進行相關性分析，為新會陳皮質量控制的研究提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜議;Atlantis T3-C18色譜柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）;DAD檢測器;Millpore simplicity-67120型超純水器;BS110S型十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）;WXJ型粉碎機（上海凱旋中藥機械制造有限公司）;KQ-100DV超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

對照品橙皮苷（中國食品藥品檢定研究院，純度96.1%，110721-201617）;對照品川陳皮素（成都萊寶科技有限公司，純度98%，AF7122105）;橘皮素（成都萊寶科技有限公司，純度98%，AF8012603）;各批次陳皮由廣州白云山陳李濟藥廠有限公司農根林藥師鑒定為茶枝柑的干燥成熟果皮;乙腈色譜純（Fisher公司）;甲醇和冰乙酸分析純（廣州化學試劑廠）;水為超純水;其他試劑均為分析純。46批新會陳皮樣品信息見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Atlantis T3-C18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流速1.0 mL/min;柱溫30℃;進樣量10 μL;檢測波長283 nm（0～30 min），330 nm（30～60 min）;梯度洗脫條件見表2。混合對照品（A）和供試品（B）溶液高效液相色譜法（HPLC）色譜圖見圖1。

2.2 供試品溶液的制備

取陳皮樣品粉末0.50 g（過80目篩），精密稱定。置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量。超聲提取30 min，放冷至室溫，補足失重。靜置后取上清液過0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取橙皮苷、川陳皮素、橘皮素適量對照品，加甲醇溶解。配成每1 mL含橙皮苷0.1537 mg、川陳皮素0.0520 mg、橘皮素0.0364 mg的混合對照品溶液，4℃保存備用。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取上述混合對照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，按“2.1”項色譜條件進樣分析，以各成分峰面積Y為縱坐標、進樣量X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線并計算回歸方程。分別得到橙皮苷（283 nm）[Y = 28.995X + 0.08（r = 0.9998）]、川陳皮素（330 nm）[Y = 34.5X + 0.1467（r = 0.9999）]、橘皮素（330 nm）[Y = 44.258X + 0.09（r = 0.9999）]。線性范圍分別為0.1537～3.0740 μg、0.0520～1.0400 μg和0.0364～0.7280 μg。

2.5 精密度試驗

精密吸取同1份混合對照品混合溶液10 μL，按“2.1”項色譜條件連續進樣6次，測得峰面積積分值，計算相對標準偏差（RSD）。橙皮苷為1.20%，川陳皮素為0.94%，橘皮素為0.85%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同1份供試品溶液10 μL，分別在0、3、6、12、24、48 h按“2.1”項色譜條件進行測定，記錄峰面積積分值，計算RSD值。橙皮苷為1.52%，川陳皮素為1.09%，橘皮素為1.43%，表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.7 重復性試驗

精密稱取同1供試樣品6份，按“2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進行分析，測得峰面積積分值。分別代入“2.4”項回歸方程，計算含量和RSD值。結果橙皮苷、川產皮素、橘皮素的RSD值分別為1.72%、1.65%、1.34%，表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收試驗

取同1批已知3種化合物含量的廣陳皮樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分成三組。分別按已知質量分數的50%、100%、150%，3個水平加入混合對照品，按供“2.2”項試品溶液制備方法制備，按“2.1”項色譜條件進行分析。測定橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的含量，計算回收率和RSD值。見表3。

2.9 樣品測定

取不同產地、不同采收時間、不同貯藏年份新會陳皮樣品，按“2.2”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進行分析，測得峰面積積分值。代入“2.4”項回歸方程，分別計算3種化合物的含量，并計算三者比例。見表4。

2.10 相關性分析

利用SPSS 19.0對46批次新會陳皮樣品的陳化年份和橙皮苷、川陳皮素、橘皮素3種化合物含量之間進行Pearson相關性分析。結果見表5。陳化年份和橙皮苷、川陳皮素沒有相關性，陳化年份和橘皮素呈負相關（P < 0.05）;橙皮苷、川陳皮素、橘皮素三者含量之間存在正相關性（均P < 0.01）。

3 討論

根據表4中數據可以得出新會陳皮橙皮苷≥2.56%，川陳皮素≥0.27%，橘皮素≥0.18%，3種化合物含量的比例在100：（7.58～22.09）：（4.89～14.55）。參考鐘永翠等[20]根據不同品種陳皮中3種黃酮類成分的含量比值，可以鑒別廣陳皮道地性。結合本實驗表5中，3種化合物之間具有顯著的正相關性，該比例范圍具有初步鑒定新會陳皮的作用。但是該范圍是否能適用所有新會陳皮，還需要更多的新會陳皮和其他產地陳皮的研究數據進一步驗證。

關于陳化年份與橙皮苷、川陳皮素、橘皮素3種化合物含量之間的相關性弱的問題，通過本實驗并結合文獻分析[21-23]，發現陳皮中這3種黃酮類化合物性質較穩定，陳化年份和陳化方式等因素對其含量的影響不大;不同批次樣品的含量差異主要是由采收期不同產生的，3種化合物的含量變化均與成熟度呈一定規律：越成熟，含量越低。即青皮的含量最高，微紅皮次之，大紅皮含量最低。

本實驗比較了甲醇-水系統和乙腈-水系統等系統。經過多次實驗，最后采用乙腈-0.5%乙酸水溶液，梯度洗脫，各化合物都能取得良好的分離度，無拖尾。吸收波長在30 min處由283 nm變為330 nm，各化合物都在最大吸收波長處采集峰面積，計算含量，減少誤差。

[參考文獻]

[1]? 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：191.

[2]? 賴昌林，吳鴻，倪根金.中藥廣陳皮與新會皮藥名出現年代考[J].中國中藥雜志，2017，42（4）：789-794.

[3]? 封宇飛，張宏武，鄒忠梅，等.HPLC法同時測定陳皮飲片中5種黃酮類化合物的含量[J].藥物分析雜志，2009， 29（1）：10-15.

[4]? 伍長春，彭曉俊，梁偉華，等.陳皮總黃酮含量5種分光光度法對比[J].時珍國醫國藥，2018，29（3）：574-576.

[5]? 王建壯，陳楚萍，龐小雄，等.二氯氧鋯比色法測定陳皮中的總黃酮[J].光譜實驗室，2013，30（6）：3134-3137.

[6]? 韋媛媛，韋賓，周吳萍，等.不同品種陳皮多糖的含量測定[J].時珍國醫國藥，2012，23（12）：3047-3048.

[7]? 莫云燕，黃慶華，殷光玲，等.新會陳皮多糖的體外抗氧化作用及總糖含量測定[J].今日藥學，2009，19（10）：22-25.

[8]? 廖素媚，黃慶華，林林，等.陳皮多糖提取工藝的研究[J].廣東藥學院學報，2007，23（6）：654-655.

[9]? 歐小群，王瑾，李鵬，等.廣陳皮及其近緣品種揮發油成分的比較[J].中成藥，2015，37（2）：364-370.

[10]? 潘靖文.GC-MS分析不同采收期廣陳皮中揮發油成分的變化[J].中國醫藥指南，2011，9（21）：258-259.

[11]? 嚴寒靜.不同貯存時間廣陳皮揮發油的成分分析[J].時珍國醫國藥，2005，16（3）：218-219.

[12]? 許姍姍，許浚，張笑敏，等.常用中藥陳皮、枳實和枳殼的研究進展及質量標志物的預測分析[J].中草藥，2018， 49（1）：35-44.

[13]? 肖建春，陳帥，袁崇均，等.HPLC法同時測定陳皮中4個黃酮類成分的含量[J].四川中醫，2012，30（7）：55-57.

[14]? 鄭國棟，蔣林，楊得坡，等.HPLC法同時測定不同產地廣陳皮中5種活性黃酮成分[J].中草藥，2010，41（4）：652-655.

[15]? 葉曉嵐，宋粉云，范國榮，等.高效液相色譜法同時測定廣陳皮藥材中的11種化學成分[J].色譜，2015，33（4）：423-427.

[16]? 李柯柯，任順成.陳皮中黃酮類化合物的研究進展[J].食品研究與開發，2017，38（17）：221-224.

[17]? 李偉偉，張國偉.陳皮黃酮類成分研究進展[J].中國醫學創新，2014，11（24）：154-156.

[18]? 趙秀玲.陳皮生理活性成分研究進展[J].食品工業科技，2013，34（12）：376-381.

[19]? 童紅梅.陳皮中黃酮類化合物藥理作用研究進展[J].山西中醫學院學報，2010，11（3）：75-76.

[20]? 鐘永翠，鞏珺，徐家能，等.基于3種黃酮類化合物含量比值鑒別廣陳皮道地性[J].藥物分析雜志，2017，37（1）：20-29.

[21]? 鄭國棟，蔣林，楊雪，等.不同貯藏年限廣陳皮黃酮類成分的變化規律研究[J].中成藥，2010，32（6）：977-980.

[22]? 林樂維，蔣林，鄭國棟，等.不同產地和采收期廣陳皮中三種黃酮類成分的含量測定[J].中藥材，2010，33（2）：173-176.

[23]? 王洋，樂巍，吳德康，等.不同采收期廣陳皮藥材三種黃酮類成分的含量測定[J].現代中藥研究與實踐，2009， 23（5）：66-68.