基于UPLC-Q/TOF-MS的間變性星形細胞瘤發病機制的系統代謝組學研究

李香蘭，韓 亮，李 淼，黃哲浩*

(吉林大學中日聯誼醫院 1.皮膚科；2.病理科；3.神經外科,吉林 長春130033)

間變性星形細胞瘤(AA)是星形膠質細胞瘤的一種，其發病機制廣泛涉及營養代謝、表觀遺傳等諸多方面[1-3]。基于系統生物學與生物信息學手段研究膠質瘤的發生機理已經取得了長足進步[4]。其中代謝組學作為關注于機體內小于1 kDa小分子代謝物新型組學手段已經被認為是揭示疾病發病機理的最佳手段之一[5]。然而，對于AA的代謝組學機制研究目前大多停留在體外細胞模型，對于機體系統水平的組學差異機制仍鮮有報道[6]。本研究采用基于超高效液相色譜四極桿高分辨時間飛行質譜(UPLC-Q/TOF-MS)聯用的代謝組學技術探討AA的發病機制。

1 材料與方法

1.1 材料甲醇、甲酸及乙腈(質譜級，Fisher Chemical公司，貨號：A4521/PI85170/A998-4)；亮氨酸-腦啡肽(Sigma-Aldrich公司，貨號：87-89-8)；雙蒸水(廣州屈臣氏公司，貨號：20170126C)；分離膠促凝管。實驗用分子生物學耗材及超高效液相進樣瓶均為無菌新開的一次性耗材。

1.2 樣本來源及患者招募患者招募自吉林大學中日聯誼醫院，均為初次診斷為AA且未受任何放化療、年齡50-60歲之間。年齡與性別匹配無神經病史健康志愿者(HC)亦被招募。所有納入研究的受試者均被明確且充分告知研究內容且簽署知情同意書。所有受試者均禁食12小時后于清晨空腹采集外周血10 ml，于分離膠促凝管中分離獲得血清，立即置于-80℃超低溫冰箱保存。

1.3 樣本處理方法所采集的血清樣本于冰上避光解凍后按1：3(v/v)的比例加入甲醇，并渦旋混勻3 min使蛋白變性并于4℃，×10,000g離心去除。……