血清Ang-2、VEGF、PCDGF在非小細胞肺癌中的診斷價值

孟凡亮 陳亞新 高建榮

摘要：目的? 探討血清血管生成素2（Ang-2）、血管內皮生長因子（VEGF）、 畸胎瘤細胞衍生生長因子（PCDGF）及癌胚抗原（CEA）、鱗狀細胞癌抗原（SCC）與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系，判斷其在非小細胞肺癌聯合診斷中的價值。方法? 收集2017年9月～2018年4月就診于安醫大附屬巢湖醫院呼吸內科，經病理確診的48例原發性非小細胞肺癌患者，收集患者臨床病理資料，年齡、性別、吸煙、病理、分期、轉移程度，并采用ELISA 法檢測48例非小細胞肺癌患者血清中Ang-2、VEGF、PCDGF含量及電化學發光檢測CEA、SCC的含量。診斷效能評價指標用ROC曲線分析，以敏感度、特異度、正確率表示。結果在鱗癌患者中Ang-2含量高于腺癌患者（P<0.05）;PCDGF在年齡≤60歲的患者中的水平低于年齡>60歲的患者（P<0.01）;對于局部轉移的非小細胞肺癌患者血清VEGF含量高于遠處轉移患者（P<0.05）;Ang-2+PCDGF聯合檢測診斷肺鱗癌靈敏度和正確率均為最高，分別為82.76%和75.00%。結論? Ang-2、PCDGF聯合檢測對于肺鱗癌的診斷價值最高，VEGF能夠更好預測非小細胞肺癌局部轉移，CEA仍然是腺癌的最敏感的標記物。

關鍵詞：血清血管生成素2;血管內皮生長因子;畸胎瘤細胞衍生生長因子;非小細胞肺癌

中圖分類號：R734.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.15.021

文章編號：1006-1959（2019）15-0066-04

Abstract：Objective? To investigate serum angiopoietin 2 （Ang-2）， vascular endothelial growth factor （VEGF）， teratoma cell-derived growth factor （PCDGF） and carcinoembryonic antigen （CEA）， squamous cell carcinoma antigen （SCC） and non-small The relationship between clinical pathological parameters of lung cancer and its value in the combined diagnosis of non-small cell lung cancer.Methods? From September 2017 to April 2018， we received 48 patients with primary non-small cell lung cancer diagnosed by pathology in the Department of Respiratory Medicine， Chaohu Hospital， Anyang University. The clinical and pathological data were collected. Age， sex， smoking， pathology， The levels of Ang-2， VEGF and PCDGF in serum of 48 patients with non-small cell lung cancer were detected by ELISA. The contents of CEA and SCC were detected by electrochemiluminescence. The diagnostic efficacy evaluation index was analyzed by ROC curve and expressed by sensitivity， specificity and correct rate.Results? The level of Ang-2 was higher in patients with squamous cell carcinoma than in adenocarcinoma patients（P<0.05）; the level of PCDGF in patients aged ≤60 years was lower than that in patients >60 years old （P<0.01）; the serum VEGF level in patients with locally metastatic non-small cell lung cancer was higher than patients with distant metastasis （P<0.05）; the sensitivity and correct rate of Ang-2+PCDGF combined detection for lung squamous cell carcinoma were the highest， 82.76% and 75.00%， respectively.Conclusion? The combined detection of Ang-2 and PCDGF has the highest diagnostic value for lung squamous cell carcinoma. VEGF can better predict the local metastasis of non-small cell lung cancer. CEA is still the most sensitive marker for adenocarcinoma.

Key words：Serum angiopoietin 2;Vascular endothelial growth factor;Teratoma cell-derived growth factor;Non-small cell lung cancer

肺癌（lung cancer，LC）是全球癌癥和與癌癥相關的死亡的主要原因。非小細胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）占大多數，約85%[1]，其余大部分為小細胞肺癌，LC的早期診斷和適當的治療對預后的改善至關重要，治療的關鍵問題是病理組織學診斷和分期[2]。新的生物標志物的發現不僅可以作為新療法的一部分，而且可以了解和評估哪些患者可以從哪些治療中受益[3]，腫瘤標志物在許多惡性腫瘤的患者管理中發揮著關鍵作用。血清腫瘤標志物的潛在用途包括幫助早期診斷、確定預后、前瞻性地預測對特定治療的反應或耐藥性、初級手術后的監測以及監測晚期疾病患者的治療。目前血管生成素-2（angiopoietin-2，Ang-2）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和畸胎瘤源性細胞生長因子（PC cell-derived growth factor，PCDGF）都是機體內重要的細胞因子，Ang-2 是近年來發現新型的與腫瘤血管生成相關一種細胞因子，促進新生血管的形成[4];VEGF是血管生長調節因子，可以調控腫瘤細胞組織周圍血管的增生過程[5];PCDGF 是一種分泌型糖蛋白，具有促進細胞增殖、發育的能力[6]。已有研究證實Ang-2及VEGF、PCDGF在NSCLC組織、血清中異常表達，然而其表達與肺癌細胞增殖、侵襲、轉移等臨床病理參數之間的關系仍有待探究，對尋找NSCLC早期診斷及治療的新靶點有重要指導意義。本研究分析了48例非小細胞肺癌患者血Ang-2、VEGF、PCDGF 、CEA、SCC水平，及其與肺癌的分期及病理類型相關性，擬探尋一組對非小細胞肺癌診斷及預后最佳的腫瘤標記物。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2017年9月～2018年4月就診于安醫大附屬巢湖醫院呼吸內科，經病理確診的48例原發性非小細胞肺癌患者，研究標本采集前均未抗腫瘤治療。本研究經安醫大附屬巢湖醫院倫理委員會同意進行，患者在首次就診時均簽署書面知情同意書。患者中男37例，女11例，年齡47～87歲，平均年齡67.63歲，鱗癌29例，腺癌19例。臨床分期依據國際癌癥控制聯盟和國際肺癌研究協會于2017年的《國際肺癌分期指南》第八版進行評估。

1.2方法

1.2.1資料收集? 收集患者臨床病理資料，包括年齡、性別、吸煙、病理、分期、轉移程度。

1.2.2指標檢測? Ang-2、VEGF、 PCDGF含量檢測采取固相夾心ELISA法，具體步驟按照試劑盒說明書進行，用酶標儀在450 nm波長測量各孔的吸光度（A）值，通過繪制標準曲線計算出樣品中Ang-2、VEGF、 PCDGF的實際濃度。CEA、SCC采用羅氏Elecsys2010免疫測定分析儀并用電化學發光免疫測定試劑，按照檢測系統操作步驟執行。

1.3統計學分析? 用SPSS 19.0軟件進行數據分析，對不符合正態分布的數據以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用非參數檢驗，多組間比較用Kruskal-Wallis H檢驗分析。診斷效能評價指標用ROC曲線分析，以敏感度、特異度、正確率表示。以P<0.05為差異有統計學意義，P<0.01表示統計學意義顯著。

2結果

2.1血清Ang-2、VEGF、PCDGF含量與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系? 鱗癌患者中血管生成素2高于腺癌患者，差異有統計學意義（P<0.05），但與年齡、吸煙、性別均無關;在非小細胞肺癌患者中對于年齡≤60歲的患者中的PCDGF水平明顯低于年齡>60歲的患者（P<0.01）;局部轉移的患者血清VEGF含量高于遠處轉移患者（Z=2.070，P<0.05），見表1。

2.2 Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC在鱗癌診斷中的價值分析? Ang-2、PCDGF、SCC對于鱗癌有一定診斷價值，但VEGF在鱗癌中的診斷價值不高;Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC對應的ROC曲線下面積 分別為0.68（95%CI：0.53，0.83），0.62（95%CI：0.46，0.79），0.46（95%CI：0.28，0.63），0.77（95%CI：0.63，0.91）。Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC的cutoff 值分別為559.52 pg/ml，553.12 μg/ml，234.17 μg/ml，1.76 μg/ml。Ang-2+PCDGF靈敏度和正確率均為最高，Ang-2在單個指標中的正確率低于SCC，高于PCDGF和VEGF，見表2。

2.3 CEA對腺癌的診斷效能比較? CEA對應的ROC曲線下面積為0.73（95%CI：0.57，0.88），cutoff 值為3.38 ng/ml，靈敏度為0.84，特異度為0.59，正確率為68.90%。

3討論

隨著對血清學腫瘤標志物的深入研究，Ang-2、PCDGF及VEGF及受到越來越多的研究者們的廣泛關注。本研究中，非小細胞肺癌患者外周血清中Ang-2、PCDGF及VEGF的表達水平與非小細胞肺癌臨床病理參數具有相關性，且聯合檢測肺鱗癌的靈敏度、特異度以及準確性均較高，說明此3項指標對非小細胞肺癌患者具有重要的臨床價值。

PCDGF又稱上皮素-顆粒素前體，是生長調節因子家族中的成員之一，具有很強的致癌作用，通過參與體內多種信號通路在腫瘤細胞的粘附、增殖、血管形成和細胞外基質降解中都發揮重要作用，從而促進腫瘤細胞的浸潤和轉移[7]。在正常機體中，PCDGF主要促進血管內皮細胞的增殖和創傷口愈合等，表達水平較低，但其在腫瘤患者體內為高表達水平[8]。PCDGF在惡性腫瘤性疾病包括肺癌中異常表達，參與了肺癌的侵襲、轉移以及血管生成過程[9]。趙玉澤等[10]報道，PCDGF在老年肺鱗癌中的表達量較其余各組比較顯著高表達，且陽性表達率在不典型增生組、鱗狀上皮化生組、炎癥對照組的表達依次下降。本研究中年齡≤60歲的NSCLC 患者其PCDGF水平低于>60歲的患者（P<0.01），在鱗癌中ROC曲線下面積為0.62（95%CI：0.46，0.79），單獨診斷鱗癌的特異度為63.16%，靈敏度62.07%，正確率62.50%，對肺鱗癌的診斷有一定的臨床價值，聯合血管生成素檢測可以避免單項檢測的漏診率。這些研究結果都表明PCDGF在腫瘤形成中發揮重要的調控作用，或許可作為肺癌診斷一個新的血清學輔助檢測指標。

目前，VEGF是一種重要的促血管內皮生長的細胞因子，其不僅能夠促進內皮細胞增殖，還可以促進血管滲漏。近年研究發現，PCDGF可以上調VEGF的表達，因此PCDGF可能作為上游蛋白通過促進VEGF的表達調節血管生成[11]。有研究發現[12]與肺部良性病變及健康者比較，肺癌患者VEGF表達量顯著升高，且肺癌臨床TNM分期越高，其表達量越高;淋巴結轉移患者的表達量高于未轉移者，提示VEGF或許在肺癌患者早期診斷及預后判斷中發揮重要作用。體外動物模型實驗表明[13]，通過抑制腫瘤中VEGF的表達，能夠明顯抑制肺癌癌細胞組織血管形成、減少腫瘤體積和提高裸鼠的生存時間。此研究結果與既往報道基本相符合。本研究中肺癌局部轉移的患者VEGF含量高于遠處轉移的肺癌患者，VEGF對于判斷非小細胞肺癌預后有一定價值。在鱗癌中ROC曲線下面積為0.46（95%CI：0.28，0.63），單獨診斷鱗癌的特異度為42.11%，靈敏度79.31%，正確率64.59%。VEGF單獨診斷肺鱗癌的準確率不是很高，聯合PCDGF及血管生成素檢測顯著提高了診斷肺鱗癌的準確率、特異度及靈敏度。

Ang-2是一種與腫瘤血管生成相關的細胞因子，能特異性地與內皮細胞特異的酪氨酸激酶受體（Tie-2）相結合從而促進新血管的生成[14]。目前研究發現，Ang-2和VEGF相互協同作用共同調節腫瘤組織周圍新生血管的生成，Ang-2可以上調VEGF的表達，而VEGF亦可反過來影響Ang-2的分泌[15]。2017年Xu Y等[16]報道的一項薈萃分析納入了1911例肺癌病例，結果顯示血清高Ang-2水平與較晚的臨床分期（Ⅲ期、Ⅳ期）、淋巴結轉移有關，而與組織學類型、年齡、吸煙、性別均無關，并且高表達的患者預后顯著較差，這表明Ang-2在腫瘤侵襲、淋巴性轉移方面起到重要作用，Ang-2的表達水平或許可作為肺癌預后預測因子。本研究結果顯示肺鱗癌患者中血管生成素顯著高于腺癌患者（P<0.05）。在鱗癌中ROC曲線下面積為0.68（95%CI：0.53，0.83），單獨診斷鱗癌的特異度為73.68%，靈敏度65.52，正確率68.75%，聯合PCDGF檢測可以減少單項檢測的漏診率。

本研究中由ROC曲線分析得出PCDGF、VEGF和Ang-2三項指標聯合檢測，對肺鱗癌診斷的敏感度和正確率分別為82.76%和72.92%，顯著高于任一單項指標的敏感度和正確率。因此，此三項指標聯合檢測可以彌補單項指標的漏診率。ROC曲線分析得出CEA對于肺腺癌的診斷，其 AUC為0.73（95%CI：0.57，0.88），靈敏度為0.84，特異度為0.59，正確率為68.90%。CEA對肺腺癌診斷的正確性中等，具有一定的臨床價值。

綜上所述，PCDGF、VEGF、Ang-2作為新發現的生物分子，在肺癌中與多項臨床病理參數密切相關，提示PCDGF可能通過調控VEGF、Ang-2的表達而促進腫瘤細胞新生血管生成，從而在NSCLC的發生發展及侵襲轉移中發揮重要作用。故聯合檢測PCDGF、VEGF、Ang-2的表達對NSCLC的早期診斷、病情的進展評估提供依據。本研究尚存不足之處：樣本量偏小，后續工作需要進一步擴大樣本量。PCDGF、VEGF、Ang-2之間通過怎樣的生物信號通路相互作用參與NSCLC的發生發展、侵襲轉移過程仍需要更加深入的探究。但是，PCDGF、VEGF、Ang-2的聯合檢測對肺鱗癌的早期診斷、病情進展的評估仍具有一定的臨床價值。

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收稿日期：2019-5-23;修回日期：2019-6-3

編輯/肖婷婷