黃芪多糖對大鼠缺血再灌注急性腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究①

王 虹 尹顯華 胡水清

(遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿內(nèi)科，遵義563000)

急性腎損傷(Acute kidney injury，AKI)是危重患者常見并發(fā)癥，統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示住院患者AKI發(fā)病率為5.0%～22.7%，死亡率高達(dá)10.8%，且死亡風(fēng)險是非AKI患者的4倍[1,2]，因此一直倍受重視。約47%的AKI是由缺血再灌注損傷(Ischemical reperfusion injury，IRI)引起的[3]。炎癥反應(yīng)在IRI過程中發(fā)揮重要作用。轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(Nuclear factor kappa B)是Toll 樣受體(Toll-like receptor，TLR)下游的關(guān)鍵因子，TLR-4/NF-κB信號通路可調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，在IRI模型AKI大鼠的腎組織中TLR-4及NF-κB蛋白高表達(dá)，提示TLR-4/NF-κB信號通路參與了AKI的發(fā)生[4]。

黃芪多糖(Astragalus polysaccharide，APS)是中藥黃芪的主要生物活性物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，APS對脂多糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞炎癥損害具有保護(hù)作用[5]，且在體內(nèi)外證實其對IRI亦具有保護(hù)作用[6]。研究還發(fā)現(xiàn)，APS可抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及心肌細(xì)胞中TLR-4及NF-κB蛋白的表達(dá)[5,7]。本課題擬研究APS對IRI大鼠AKI是否具有保護(hù)作用，及其機(jī)制是否與抑制TLR-4/NF-κB信號通路有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 材料 APS購自天津賽諾制藥有限公司；TRIzol試劑購自美國 Invitrogen公司；dNTP Mixture、RNA酶抑制劑、SYBR?Premix Ex TaqTM購自寶生物工程(大連)有限公司；MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶購自普洛麥格(北京)生物技術(shù)有限公司；兔抗鼠TLR-4、NF-κB(p65)一抗購自美國Eptomics公司；兔抗鼠GAPDH一抗、山羊抗兔二抗、免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋公司；引物設(shè)計合成由上海生工生物工程有限公司完成；實驗用SD雄性大鼠購自遵義醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立 SD大鼠共96只，8～10周齡，體重250～300 g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(對照組)、模型組、APS低劑量治療組和APS高劑量治療組，每組24只。根據(jù)參考文獻(xiàn)[3]建立動物模型:大鼠俯臥位，7%水合氯醛按0.3 g/kg腹腔注射麻醉?！?br>