高海拔地區(qū)藏族和漢族乳腺浸潤性導(dǎo)管癌凋亡相關(guān)蛋白及凋亡指數(shù)的研究*

楊娟，李亞飛，宋曉燕，袁青玲，祁玉娟

（青海省人民醫(yī)院，青海 西寧 810007）

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升[1]，其在不同地域、種族和民族間存在差異[2]。腫瘤大小、淋巴結(jié)陽性率、激素受體、HER-2及Ki-67指數(shù)是乳腺癌預(yù)后因素[3]。Bcl-2作為一種凋亡抑制基因，對乳腺癌的預(yù)后及轉(zhuǎn)移具有預(yù)測作用[3-4]。本研究通過免疫組織化學(xué)法研究世居青海的藏族和漢族乳腺浸潤性導(dǎo)管癌Bcl-2、Bax、Caspase-3及凋亡指數(shù)（apoptosis index, AI）的表達(dá)，探究高海拔地區(qū)藏族與漢族乳腺癌生物學(xué)行為的差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年12月—2015年12月在青海省人民醫(yī)院接受手術(shù)治療的藏族和漢族乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者各60例。臨床分期按美國癌癥聯(lián)合會第7版臨床分期[5]。以Bloom-Richardson系統(tǒng)方案對乳腺癌組織學(xué)進(jìn)行分級[6]。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及其家屬簽署知情同意書。

1.2 試劑與儀器

Bcl-2鼠抗人單克隆抗體（丹麥DAKO公司），Caspase-3、Bax 兔抗人單克隆抗體（北京中山生物技術(shù)有限公司），免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)采用丹麥DAKO公司ChemMate EnVision檢測系統(tǒng)K500711檢測試劑盒，原位DNA缺口末端標(biāo)記（terminal deoxynucleotidy transferase-mediated digoxigenin-11-dUTP nick end labeling, TUNEL）選用瑞士羅氏公司診斷試 劑盒。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本收集及處理手術(shù)切除的新鮮乳腺浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本，取組織中心部分，10%中性甲醛溶液固定，分別用于蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色、免疫組織化學(xué)染色及AI研究。

1.3.2 HE染色將已固定的組織標(biāo)本經(jīng)梯度脫水、浸蠟及包埋后，以4μm厚度為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。

1.3.3 免疫組織化學(xué)染色檢測Bcl-2、Bax及Caspase-3的表達(dá)高壓處理組織切片后，修復(fù)暴露抗原。設(shè)置陽性和陰性對照，陽性對照為已知陽性切片，空白對照用磷酸鹽緩沖溶液代替一抗，嚴(yán)格遵守試劑盒說明書操作?！?br>