明膠膠囊的微生物限度檢查方法研究

于金婷

【摘 要】明膠空心膠囊主要用于藥物的包裝，對藥物質量有著直接的影響。為了保證明膠膠囊符合藥典要求，需要我們進行相應的微生物限定檢查。我們主要對微生物檢查方法的可行性進行研究，通過實際的試驗測試，對明膠空心微生物的限定檢查方法的可行性進行研究。根據實際的實驗操作得知，該檢測方法可以用于明膠空心膠囊的微生物限定檢查。

【關鍵詞】明膠膠囊;微生物限定檢查;方法研究

中圖分類號： R927.1文獻標識碼： A 文章編號： 2095-2457（2019）13-0180-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.13.086

Study on Microbial Limit Test Method for Gelatin Capsules

YU Jin-ting

（Sino-US Shanghai Squibb Pharmaceutical Co.，Ltd.Shanghai 200240，China）

【Abstract】Gelatin hollow capsules are mainly used for drug packaging， which has a direct impact on the quality of drugs. In order to ensure that gelatin capsules meet the requirements of the Pharmacopoeia，we need to carry out the corresponding microbial limit test. We mainly study the feasibility of microbial examination methods. Through the actual test， we study the feasibility of the limited examination methods of gelatin hollow microorganisms. According to the actual experimental operation， the method can be used for the microbial limit test of gelatin hollow capsules.

【Key words】Gelatin capsules; Microbial limit test; Methodological study

0 引言

明膠膠囊主要用于包裝藥物，需要通過微生物限定檢查，才能保證明膠膠囊沒有受到微生物的污染。我們制定了相應的限定檢驗方法，進行明膠膠囊微生物限定的檢查工作。為了避免檢驗結果出現假陰性，我們設置了相應的陰性對照組，可以對照有菌生長的情況。本文主要對明膠膠囊的微生物限定檢查方法進行研究，并確定該限定檢查方法是否具符合檢查要求[1]，下面為具體的研究內容：

1 實驗設備和材料

1.1 實驗設備

我們在進行檢驗方法的研究前，需要進行合理的準備工作，首先要進行實驗設備的準備。我們對實驗分析以后，需要準備以下幾種試驗設備：第一，生物安全柜。主要用于保護實驗者、試驗環境及材料，避免出現感染性氣溶膠和濺出物。第二，天平。主要用于實驗稱量，我們選擇精準度為±0.1g天平用于本次實驗測量。第三，培養箱。主要用于菌落的培養工作，根據實際的試驗需要我們選擇具有多個溫度調節檔位的培養箱。第四，冰箱。用于菌落的存放，溫度調控在2-8℃之間。第五，水浴鍋。主要用于實驗中的蒸餾、干燥、濃縮等等需求。第六，恒溫搖床。主要用于菌落的培養工作。第七，旋渦混合器。主要用于試驗中的振蕩和渦旋要求。

1.2 實驗用品

接下來需要我們進行試驗用品的準備工作，首先準備接種環，用于微生物的接種需求。根據實驗需求，準備各種型號的無菌容器、無菌管、無菌移液管、90mm無菌培養皿。

1.3 稀釋液和培養基

其次需要我們準備實驗需要的培養名和稀釋液，我們準備的稀釋液為無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液和無菌磷酸緩沖液，前者PH值為7.0，后者PH值為7.2。根據實驗需要我們準備了較多的培養基，分別為（TSB）胰酪大豆胨液體培養基、（TSA）胰酪大豆胨瓊脂培養基、（SDA）沙氏葡萄糖瓊脂培養基、（MCB）麥康凱液體培養基、（MCA）麥康凱瓊脂培養基、（RVS）沙門菌增菌液體培養基、（XLD）木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基、（CAB）溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基。

1.4 檢測菌種

在完成實驗用品的準備工作后，我們最后進行檢測菌種的準備工作。根據實際的實驗需求，我們選擇了多種檢驗菌種，分別：ATCC9027銅綠假單胞菌、ATCC6538金黃色葡萄球菌、ATCC8739大腸埃希菌、ATCC6633枯草芽孢桿菌、ATCC10231白色念珠菌、ATCC16404巴西曲霉、ATCC14028乙型副傷寒沙門菌、現場菌[2]。

2 檢查方法

2.1 氧菌總數計數/霉菌及酵母菌總數計數檢測

2.1.1 供試液制備

在完成所有準備工作以后，我們就可以進行正式的實驗，首先進行供試液的制備工作。先將90ml磷酸緩沖液存放在2-8℃環境下1h，在達到存放時間以后取10g樣品放入預制的緩沖液中，放入以后需要進行人工振搖的操作，將樣品膠囊的表明完全潤濕在緩沖液中，在全部潤濕以后，將膠囊放在剛才用于存放緩沖液的環境中，并等待1h。將樣品取出放置在恒溫搖床中，并將溫度調節值45℃左右，并制成1：10均勻的供試液。在完成上述工作以后，需要進行供試液PH值的測量工作，正常情況下供試液的PH值應該在6-8之間，如果測量的PH值沒有達到上述要求，需要我們使用NaOH或HCL進行PH值的合理調整，直到達到需要的PH值，這就得到了我們需要的檢測供試液，用于TAMC和TYMC的檢測實驗。

2.1.2 試驗組

我們先進行需氧菌總數計數操作，將制備出的供試液進行防治在無菌試管中，總共選擇6份9.9ml的供試液，在每個試管加入供試液之后，分別加入試驗菌懸液，加入的菌懸液為ATCC6538金黃色葡萄球菌，ATCC6633枯草芽孢桿菌，ATCC9027銅綠假單胞菌菌懸液，ATCC10231白色念珠菌菌懸液，ATCC16404巴西曲霉菌懸液，現場菌，總共可以得到六分含菌溶液，我們在含菌溶液的調配時，需要對含菌量進行和控制，將含菌量控制在100CFU/ml以內。得到需要的含菌容易以后，取1mml防治在無菌平皿中，最后加入胰酪大豆胨瓊脂培養基。接下來進行霉菌及酵母菌總數的計數操作，跟上述實驗步驟基本相同，但是采用的試驗菌懸液不同，主要選擇ATCC10231白色念珠菌菌懸液、ATCC16404巴西曲霉菌懸液，在制備含菌溶液以后，同樣對含菌量進行合理的控制，要注意的是最后我們將制備的含菌溶液加入到沙氏葡萄糖瓊脂培養基[3]。

2.1.3 稀釋劑對照組

稀釋劑對照組使用的緩沖液為無菌磷酸緩沖液，PH值為7.2，菌懸液的添加方式參照實驗組。如果在試驗過程中，不需要使用中和劑，我們可以取消稀釋劑對照組這一試驗步驟。

2.1.4 菌液對照組

進行菌液對照組的操作時，與稀釋劑對照組基本相同，只是選擇的緩沖液類型不同，菌液對照組選擇無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，PH值為7.0。

2.1.5 供試品對照組

按照上述試驗組的操作方式，將菌液換成無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，使用供試液進行試驗操作。

2.1.6 稀釋劑陰性對照

先準備好4個無菌平皿，然后在兩個平皿中放入1mlpH7.2無菌磷酸緩沖液，并放入胰酪大豆胨瓊脂培養基，另外兩個加入同樣的緩沖液，加入沙氏葡萄糖瓊脂培養基。

2.1.7 培養基陰性對照

跟稀釋劑陰性對照操作基本一致，但是不需要加入緩沖劑，直接按照上述試驗進行培養基的加入。

2.1.8 培養與觀察

在完成上述實驗操作以后，我們就可以進行菌落數量的計數工作，為了方便菌落數量的觀察，我們需要對培養時間進行合理的把控。將TSA平皿控制在3天以內，溫度控制在30-35℃，SDA平皿控制在5天以內，溫度控制在20-25℃。在觀察結束以后，將數據進行記錄工作。

2.2 控制菌檢查

2.2.1 大腸埃希菌檢查

我們先進行大腸埃希菌的檢查工作，將TSB放置在2-8℃環境下存放1h，將10g樣品放置在準備好的TSB中，并進行膠囊表面的潤濕操作，放置在2-8℃環境下存放1h。取出放入45℃左右的恒溫搖床中，并加入大腸埃希菌，并進行搖勻處理，上述操作為實試驗組操作。接下來去100mlTSB加入0.1ml大腸埃希菌，并進行合理的搖勻處理，得到陽性對照。按照試驗組操作進行制備，但不添加大腸埃希菌，作為供試品對照組。將100TSB取出放置在指定的位置上，作為陰性對照。完成上述操作以后，我們就可以進行培養與觀察，將TSB放置在30-35℃培養箱中進行培養，在18h后取出1mlTSB放置在麥康凱液體培養基中，并進行搖勻處理。將培養箱的溫度調節值42-44℃，培養24h。在增殖肉湯中使用接種環挑出樣品，并將樣品涂勻在培養基上，將溫度調節到30-35℃培養18h，進行數據結果的記錄工作。將接種的菌落和試驗組的菌落分別放置在平皿中，并加入TSA培養基，使用30-35℃進行培養，將培養時間控制在3天。

2.2.2 銅綠假單胞菌檢查

在進行銅綠假單胞菌檢查時，與大腸埃希菌的檢查步驟基本一致，在試驗組階段，所有操作相同，將加入的菌落替換為銅綠假單胞菌即可。在進行陽性對照實驗時，將加入的菌落替換為銅綠假單胞菌。供試品對照組和陰性對照與大腸埃希菌一致。最后進行培養和計數工作，與上述相同。

2.2.3 沙門氏菌檢查

在進行沙門氏菌檢查時，與大腸埃希菌的檢查步驟基本一致，在試驗組階段，所有操作相同，將加入的菌落替換為沙門氏菌即可。在進行陽性對照實驗時，將加入的菌落替換為沙門氏菌。供試品對照組和陰性對照與大腸埃希菌一致。最后進行培養和計數工作，與上述相同[4]。

3 方法適用性檢查記錄

3.1 TYMC方法適用性檢查記錄

3.2 控制菌方法適用性檢查記錄

根據表1和表2的檢查記錄可知，每次試驗均符合要求，可以用于明膠空心膠囊的微生物限定檢查工作。

4 結論

本文先進行了實驗準備工作的研究，將實驗中需要的設備、菌種、用品、稀釋液及培養基，對每種實驗用品的功能進行了大體的介紹。然后我們進行了氧菌總數計數/霉菌及酵母菌總數計數檢測工作，按照設計的實驗環節進行操作，保證實驗的規范性。接下來我們對控制菌進行檢查，主要選擇三種控制菌，分別為大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌檢查。通過實驗的方式進行三種菌種的觀察和記錄工作。最后根據上述試驗數據繪制出檢查表格。根據表格上的數據可知，三次試驗結果均符合要求，說明該方法可以用于明膠空心膠囊的微生物限定檢查，希望可以為明膠膠囊今后的限定檢查提供參考[5]。

【參考文獻】

[1]石晶萍，梁元太，徐開祥.明膠空心膠囊鉻元素AAS法測定不確定度評定研究[J].中國藥事，2017，31（1）：37-42.

[2]呂東巖，王瑩，包懿，等.GC/MS測定明膠空心膠囊中17種塑化劑[J].吉林蔬菜，2017（9）：30-32.

[3]王發英，吳查青.明膠空心膠囊中7種元素含量測定方法的建立與應用[J].中國藥房，2017，28（28）：3992-3995.

[4]陳豐農，陳浦蘭，謝亞平，等.基于高光譜成像技術的藥用膠囊鉻含量快速檢測方法研究[J].計量學報，2017（6）：769.

[5]宋薇，高俊海，宋桂雪， et al.石墨化碳黑凈化-分光光度法測定明膠空心膠囊中的六價鉻[J].食品安全質量檢測學報，2017，8（3）：761-766.