水通道蛋白3介導(dǎo)過氧化氫轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖、遷移的作用研究*

袁芳，史永華

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室，新疆 烏魯木齊 830011）

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一[1]。宮頸癌患者一個(gè)重要的臨床病理特點(diǎn)是常合并長(zhǎng)期慢性宮頸炎并伴隨組織水腫。水腫是病變組織水代謝紊亂的外在表現(xiàn)，而其內(nèi)在原因可能與水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）功能異常關(guān)系密切。AQPs 是一組跨細(xì)胞質(zhì)膜由滲透壓驅(qū)動(dòng)選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的小而完整的糖蛋白，廣泛存在于活細(xì)胞內(nèi)，主要參與各種涉及水代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)的生理病理過程[2]。研究表明，AQPs 廣泛參與惡性腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等過程[3-4]。

在慢性炎癥向癌癥的轉(zhuǎn)化過程中，缺氧、持續(xù)性炎癥等應(yīng)激性微環(huán)境引起組織水腫，活性氧（reactive oxygen species,ROS）尤其過氧化氫H2O2不斷產(chǎn)生。新近研究報(bào)道，AQPs 的某些亞型不僅能夠跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)水分子，還可以轉(zhuǎn)運(yùn)H2O2[5]。目前有關(guān)應(yīng)激性微環(huán)境中H2O2的異常與AQPs 在惡性腫瘤特別是宮頸癌發(fā)生、進(jìn)展中的作用文獻(xiàn)報(bào)道極少，其具體的分子機(jī)制更是鮮有報(bào)道。本研究初步探討AQP3 和腫瘤微環(huán)境中H2O2的關(guān)系及其對(duì)宮頸癌HeLa 細(xì)胞增殖、遷移的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與試劑

HeLa 細(xì)胞（本實(shí)驗(yàn)室保存），pLVshRNA-EGFP （2A）Puro-shRNA 干擾雙標(biāo)RNAi 慢病毒載體（VL3103，北京Inovogen 公司），慢病毒包裝系統(tǒng)（12260，12259，美國(guó)Addgene 公司），質(zhì)粒抽提試劑盒（D6915，美國(guó)Omega Bio-Tek 公司），AQP3 一抗（ab125219，英國(guó)Abcam 公司），ROS 檢測(cè)試劑盒（含綠色熒光探針DCFH-DA 和高純度H2O2，E004，南京建成生物工程所），cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（K1622，美國(guó)Fermentas 公司）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

宮頸癌HeLa（人子宮頸腺癌細(xì)胞，HPV18 陽(yáng)性）培養(yǎng)于DMEM 培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）、青/鏈霉素（10 萬u/L），于37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。……