人WDR79基因啟動子表達載體的構建及鑒定

楊 潮，何小楊，莫淑芳，戴 京，張欣宇，陳 慧

?

人基因啟動子表達載體的構建及鑒定

楊 潮，何小楊，莫淑芳，戴 京，張欣宇，*陳 慧

(贛南師范大學生命科學學院，江西，贛州 341000 )

人是一種重要的支架蛋白，在端粒酶組裝、卡哈爾體（Cahar body）形成和DNA損傷修復等過程中發揮著重要作用。采用PCR擴增技術獲得人WDR79基因啟動子上游DNA序列，構建人基因啟動子熒光素酶報告基因載體pGL3--promoter；通過雙酶切、瓊脂糖凝膠電泳、DNA測序和熒光素酶活性測定等實驗手段，驗證質粒pGL3--promoter構建的正確性及其表達活性。本研究結果為進一步探討人基因表達的調控機制奠定實驗基礎。

；啟動子克隆；熒光素酶活性檢測

（WD repeat-containing protein 79）蛋白，又被稱為WRAP53或TCAB1，隸屬于WD重復蛋白家族，編碼該蛋白的基因定位于人染色體17p13.1，與人抑癌基因以“頭對頭”的方式重疊。基因由13個外顯子組成，其中包含了3個可選的起始外顯子1-α，1-β和1-γ，編碼的蛋白產物由548個氨基酸構成，分子量約為59 kD[1]。作為卡哈爾體重要組成成分的蛋白在細胞核和細胞質中均有表達，可為蛋白質和RNA復合物的裝配提供平臺，在蛋白質運輸、RNA加工及轉錄以及DNA損傷修復等生理過程中發揮著重要功能[2-3]。近年來，有研究發現在頭頸癌、直腸癌、乳腺癌和肺癌等多種癌癥中高表達，且其表達水平與癌癥病人的預后相關[4-5]，然而迄今對的表達調控機制尚未明確。為此，本研究通過克隆人基因啟動子，構建人啟動子熒光素酶表達載體，并對其活性進行驗證，為進一步探討人基因表達的調控機制奠定實驗基礎。……