MMP-14在胃腸間質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義

王艷，胡祖良，董小芳，王超群

（義烏天祥醫(yī)療東方醫(yī)院，浙江 義烏 322100）

胃腸間質(zhì)瘤（GISTs）是消化道最常見的間葉源性腫瘤，其最常見于胃，也可發(fā)生于食管、腸道及腹、盆腔等多個部位。目前臨床上對GISTs的良惡性生物學(xué)行為的判斷缺乏金標(biāo)準(zhǔn)，主要依據(jù)腫塊原發(fā)部位、腫瘤大小、腫瘤有無破裂及核分裂象計數(shù)來評估[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶-14（MMP-14）是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的一個重要成員，是編碼相對分子質(zhì)量為66kDa的蛋白質(zhì)，在乳腺癌等多種腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用[2]。目前，關(guān)于MMP-14在GISTs中的表達(dá)及意義，國內(nèi)外僅見個別文獻(xiàn)報道[3]。本文采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測132例GISTs組織中MMP-14蛋白的表達(dá)，以求進(jìn)一步探討GISTs中MMP-14的表達(dá)并分析其在GISTs臨床生物學(xué)行為評估中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2007年1月-2016年7月本院病理科GISTs石蠟標(biāo)本132例。其中男83例，女49例；年齡25-90歲，中位年齡64歲，其中>50歲者114例，≤50歲者18例；腫瘤部位：胃80例，腸道36例（其中小腸32例、直腸4例），其他16例（其中腹盆腔14例、食管2例）；根據(jù)腫瘤細(xì)胞形態(tài)：梭形細(xì)胞型119例，上皮樣細(xì)胞型6例，混合細(xì)胞型7例；腫塊長徑≤2.0cm者15例，≤2.1~5.0cm者61例，≤5.1~10.0cm者42例，>10.0cm者14例；核分裂計數(shù)：≤5/50HPF者88例，6-10/50HPF者17例，>10/50HPF者27例；所有病例腫塊均未見破裂；依據(jù)改良的NIH危險度評估標(biāo)準(zhǔn)[4]：極低危12例，低危39例，中危32例，高危49例。所有病例均依據(jù)組織病理形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化檢測結(jié)果確診為GIST。

1.2 方法 所有組織以10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，3~4μm連續(xù)切片。免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)采用EnVision二步法：檸檬酸鹽緩沖液高壓熱修復(fù)，0.3%H2O2室溫孵育10~15分鐘，以1：100稀釋比例滴加兔抗人MMP-14多克隆抗體 （克隆號：H-72，Santa Cruz公司）室溫孵育60~70分鐘，之后用EnVision二步法試劑盒 （Dako公司）室溫孵育40分鐘，最后用DAB顯色劑（Dako公司）顯色5~8分鐘，蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封蠟。以PBS代替一抗作為陰性對照，以既往MMP-14陽性的乳腺癌組織作為陽性對照。

1.3 免疫組化評分 MMP-14蛋白染色主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿。MT1-MMP染色結(jié)果判定采用以下標(biāo)準(zhǔn)[5]：染色強(qiáng)度計分：0分無染色，1分淡黃色，2分棕黃色，3分棕褐色；染色范圍計分：0分無陽性細(xì)胞，1分 1%~25%，2分 26%~50%，3分 51%~75%，4分76%~100%。兩者相加得分0-7分，以得分≥3分且切片中≥5%細(xì)胞染色視為陽性。染色結(jié)果判讀由兩位病理醫(yī)師獨(dú)立完成。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 MMP-14的表達(dá)及分布 MMP-14蛋白定位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中 （圖1）。在132例GISTs組織中，86例MMP-14蛋白呈陽性表達(dá) （65.15%），46例MMP-14呈陰性表達(dá)（34.85%）。

2.2 MMP-14與病理特征的關(guān)系 比較MMP-14陰性與陽性表達(dá)的GISTs患者臨床病理特征發(fā)現(xiàn)，與年齡≤50歲、原發(fā)于胃、腫塊長徑≤2cm、風(fēng)險度極低的GISTs患者相比，MMP-14蛋白陽性率在年齡＞50歲、胃以外部位、腫塊長徑>2cm、低/中/高風(fēng)險度的GISTs患者中顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。 詳見表 1。

表1 MMP-14表達(dá)與GISTs臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

GISTs是一類特殊的胃腸道間葉源性腫瘤，研究發(fā)現(xiàn)其來源于胃腸慢波運(yùn)動的起搏細(xì)胞（Cajal細(xì)胞）[6]，故目前認(rèn)為GISTs是獨(dú)立于平滑肌源性腫瘤和神經(jīng)源性腫瘤之外的特殊腫瘤。GISTs最常見于胃，并可以發(fā)生在包括食管至直腸的任何部位及腹腔、盆腔內(nèi)網(wǎng)膜和腸系膜中。GISTs生物學(xué)行為不一，可為惰性或顯著惡性，研究與其危險度相關(guān)的生物標(biāo)記物有較大的臨床意義。

膜型基質(zhì)金屬蛋白酶（MT-MMPs）是基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的一個亞家族，它們主要參與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix/ECM）降解和代謝，目前已發(fā) 現(xiàn) MT1-MMP/MMP-14、MT2-MMP/MMP-15、MT3-MMP/MMP-16、MT4-MMP/MMP-17、MT5-MMP/MMP-24、MT6-MMP/MMP-25 六種成員[7]。 其中MMP-14在乳腺癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞性肝癌、纖維肉瘤等多種腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用[2，8]。MMP-14除了可降解細(xì)胞外基質(zhì)，還可促進(jìn)腫瘤間質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞分泌MMP-2前體（proMMP-2）和MM-9前體（proMMP-9），并進(jìn)一步激活這些前體MMPs，進(jìn)而促進(jìn)基質(zhì)降解和腫瘤細(xì)胞遷移[8]。另外Akanuma等[9]報道食管鱗狀細(xì)胞癌中上游微小RNA-133α （miR-133α） 可調(diào) 控MMP-14表達(dá)，進(jìn)而影響癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。潘獻(xiàn)柱等[3]發(fā)現(xiàn)，MMP-14陽性表達(dá)與GISTs的危險度有密切的關(guān)系。

目前研究已證實(shí)，胃以外原發(fā)部位、較大腫瘤長徑、較多的核分裂象等特征提示高危GISTs，存在這些特征的病例預(yù)后較差[4]。本研究的結(jié)果顯示GISTs中MMP-14蛋白的表達(dá)率為65.33%，且在胃以外部位GISTs、腫塊長徑>2cm的GISTs中MMP-14的表達(dá)率顯著升高。因此，MMP-14蛋白表達(dá)與GISTs危險度密切相關(guān)，其有潛力作為GISTs生物學(xué)行為評估的一個潛在標(biāo)志物。