葉酸代謝基因多態性及血漿同型半胱氨酸水平與新生兒早產、出生體重的關系

王瑞 吳淑貞 陳娟 李藝英

[摘要]目的 探討葉酸代謝基因多態性及血漿同型半胱氨酸（Hcy）水平與新生兒早產、出生體重的關系。方法 選取2016年1月～2017年12月在我院產檢并最終在我院分娩的孕婦344例作為研究對象，于孕早期采集口腔黏膜標本進行檢測，根據基因檢測結果，對葉酸代謝障礙遺傳風險進行分級，將其分為中/高風險組182例，無/低風險組162例，同時采血檢測其Hcy水平。分析Hcy水平與新生兒早產、出生體重的相關性，比較兩組的早產發生率等。結果 Hcy水平與新生兒出生體重成正相關（r=0.143，P=0.008）;MTRR A66G基因型與新生兒早產成正相關（r=0.126，P=0.019）;基因型總風險與新生兒早產成正相關（r=0.120，P=0.026）。中/高風險組的早產率高于無/低風險組，差異有統計學意義（P=0.027）。分娩巨大兒的孕婦Hcy水平高于分娩正常出生體重兒及低出生體重兒的孕婦，差異有統計學意義（P<0.05）;葉酸代謝障礙不同風險程度出生體重分布比較，差異無統計學意義（P=0.483）。結論 葉酸利用能力與早產具有相關性，葉酸代謝障礙中/高風險組的早產發生率顯著升高;新生兒出生體重受孕母Hcy水平影響，孕母Hcy水平與新生兒出生體重成正相關。

[關鍵詞]葉酸代謝基因多態性;早產;同型半胱氨酸;出生體重

[中圖分類號] R714.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）2（b）-0004-04

早產指妊娠滿28周至不足37周（196～258 d）間分娩者。此時娩出的新生兒稱為早產兒，體重為1000～2499 g。早產兒各器官發育尚不夠健全，出生孕齡越小，體重越輕，其預后越差。早產兒容易在新生兒期發生嚴重疾病或死亡，我國出生1歲以內死亡的嬰兒約2/3為早產兒[1]。早產兒如果得不到適當治療，幸存下來的嬰兒將面臨更高的終身殘疾和低生活質量風險。雖然世界衛生組織多次提出關于改善早產結果的干預措施建議，但目前有關早產的預防和改善的結果并不令人滿意，調查顯示發展中國家早產發生率約為15%，我國的早產發生率為5%～15%，發達國家控制較好，美國為12%～13%，其他發達國家為5%～9%，但近年來有呈上升趨勢[2]。早產的病因、發病機制尚未闡明。隨著分子醫學的發展，發現早產可能通過遺傳和環境的相互作用而發病[3-4]，其中葉酸代謝障礙就是其中的一個研究熱點。一些酶基因的突變可影響體內活性葉酸水平及同型半胱氨酸（Hcy）水平，造成葉酸代謝異常和葉酸利用能力下降[5]。一些研究表明，Hcy的積累成為各種發育障礙的危險因素[6]。基因多態性與葉酸、Hcy及早產發生、出生體重的關系成為近年產科及生化、遺傳學等領域的研究熱點。本研究旨在探討葉酸代謝基因多態性及血漿Hcy水平與早產、出生體重的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月在我院產檢并最終在我院分娩的單胎妊娠的孕婦344例作為研究對象。納入標準：①漢族婦女;②年齡18～45歲。排除標準：①夫妻雙方有遺傳病史;②孕婦有宮頸手術史;③孕婦有吸煙史。本研究已經本院醫學倫理委員會批準，入組女性均自愿參加并簽署知情同意書。于孕早期（8～12周）采集口腔黏膜標本，同時采血檢測其Hcy水平，根據3個DNA 單核苷酸多態性位點（MTHFR C677T、 A1298C 和 MTRR A66G）的檢測結果分為高度風險、中度風險、低風險和未發現風險4級，其中，中/高風險組182例;無/低風險組162例。中/高風險組中，年齡21～43歲，平均（29.36±3.88）歲;孕齡30～41周，平均（38.60±1.57）周;體重指數（BMI）17.90～36.59 kg/m2，平均（25.79±4.01）kg/m2;高血壓5例，糖尿病22例。無/低風險組中，年齡22～43歲，平均（29.80±4.68）歲;孕齡31～41周，平均（38.75±1.26）周;BMI 16.23～40.98 kg/m2，平均（25.83±4.27）kg/m2;高血壓7例，糖尿病23例。兩組的年齡、孕齡、BMI，高血壓、糖尿病發生率比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 葉酸代謝障礙遺傳檢測與風險評估? 采集受檢者的口腔黏膜上皮細胞，利用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA，采用Taqman-MGB技術，檢測MTHFR C677T、A1928C和MTRR A66G的基因多態性。

1.2.2 血漿Hcy測定? 采集受檢者口腔黏膜上皮細胞當天，采取受檢者靜脈血5 ml采用雅貝公司的IMX全自動快速免疫分析儀測定血漿Hcy水平。

1.3 觀察指標

新生兒早產發生率和新生兒出生體重。根據測量的新生兒出生體重值，可分為低出生體重、正常體重和巨大兒，其中低出生體重是指出生體重<2500 g者，2500 g≤出生體重<4000 g者為正常體重，出生體重≥4000 g者則為巨大兒。

1.4 統計學方法

數據采用SPSS 21.0軟件進行統計分析，采用Pearson相關分析統計連續變量間的相關性;計量資料用均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗或方差分析;計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同葉酸代謝基因型、Hcy與早產、出生體重的相關性

血漿Hcy水平與出生體重成正相關（r=0.143，P=0.008），MTRR A66G基因型及基因型總風險與早產呈成相關性（r=0.126，P=0.019;r=0.12，P=0.026）（表1）。

2.2 不同基因型下血漿Hcy水平的比較

葉酸代謝不同基因型下血漿Hcy水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05），說明葉酸代謝不同基因型對血漿Hcy水平無影響。根據基因型推測出的葉酸代謝障礙總風險也同樣對血漿Hcy水平無影響（表 2）。

2.3 早產危險因素的單因素分析

早產者血漿Hcy水平低于足月產者，但差異無統計學意義（P=0.186）。葉酸代謝障礙中/高風險組的早產發生率為28.0%，高于無/低風險組的17.9%，差異有統計學意義（P=0.027），葉酸代謝高/中風險發生早產風險是低/無風險的1.8倍（OR=1.8）（表3）。

2.4 新生兒出生體重影響因素的單因素分析

分娩巨大兒的孕婦Hcy水平高于分娩正常出生體重兒及低出生體重兒的孕婦，差異均有統計學意義（P<0.05）;葉酸代謝障礙不同風險程度出身體重分布比較，差異無統計學意義（P=0.483）（表4）。

3討論

葉酸是細胞生長和分裂的一種基本維生素，但不能在人體中合成，因此必須從外界獲取。獲取的葉酸在體內主要通過甲基化和轉硫兩種方式代謝，在葉酸代謝途徑中涉及的一些酶的基因多態性與神經管缺陷、心血管疾病、唐氏綜合征、自發性流產、淋巴細胞白血病、乳腺癌、胃癌、食管癌、阿爾茨海默病和其他疾病有關[7-9]。MTHFR是一種與葉酸代謝有關的速率限制酶，它催化5-亞甲基四氫葉酸及10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸，并繼而轉化為Hcy和甲硫氨酸[10]。目前已經確定了近20個基因突變，最常見的MTHFR突變包括C677T和A1298C，該基因突變將導致酶活性降低。由于個體遺傳體質差異的存在，有一部分人由于MTHFR、MTRR基因發生風險突變而導致其對葉酸的利用能力降低，使不同的孕婦補充等量葉酸后，體內的葉酸活性產物濃度卻存在差異[11]。

多項研究表明，MTHFR、MTRR基因多態性是葉酸代謝障礙發生的遺傳易感性因素。杜景云等[2]對440例孕婦MTHFR活性的檢測及其等位基因與基因型頻率分析，發現早產臨產孕婦組MTHFR活性遠低于健康孕婦組（P<0.001）。所有5個單核苷酸多態性（SNPs）（rs4846049、rs1476413、rs180131、rs180133、rs9651118）基因型分布都符合 Hardy-Weinberg平衡，其中rs1801131和rs180133在早產臨產孕婦組與同孕周健康孕婦組的基因型分布有顯著差異。但Wang等[12]的研究團隊研究了11個涉及葉酸代謝和早產的基因中12個SNPs之間的聯系，發現與葉酸代謝途徑相關的12個SNPs基因型分布中沒有一個顯示出與早產具有顯著差異，在這項研究中篩選的12個SNPs并不是早產的獨立危險因素。

本研究通過研究葉酸代謝基因多態性與早產及出生體重的相關性，發現葉酸代謝障礙高風險者的早產發生率明顯升高，差異有統計學意義且通過早產危險因素單因素分析發現，葉酸代謝障礙中/高風險組的早產發生率為28.0%，高于無/低風險組的17.9%，差異有統計學意義（P=0.027），葉酸代謝高/中風險發生早產風險是低/無風險的1.8倍（OR=1.8）。因此可通過孕早期檢查葉酸代謝障礙，及早發現葉酸代謝障礙風險者，并為高風險及中風險孕婦提供補充葉酸方案預防早產，改善妊娠結局及新生兒預后。同時，發現MTRR A66G基因型與早產具有相關性。鑒于本研究納入的樣本數量有限、地域有限制，該結論仍需要擴大樣本量、嚴控數據質量進行進一步的驗證研究。

另外，本研究發現，葉酸代謝障礙不同風險程度下出生體重分布比較，差異無統計學意義（P>0.05），但孕期母血Hcy水平與新生兒體重成正相關。根據文獻資料，孕期母血Hcy水平與胎兒生長的關系是有爭議的[13-18]。最早研究Hcy與胎兒生長受限關系的團隊是Burke等[14]，他們的研究結論是高Hcy血癥并不會導致胎兒生長受限發生率增高。加拿大學者Infante-Rivard等[15]提出了不同的觀點，其用2年時間進行了一項病例對照研究，發現孕期母血Hcy水平與新生出生體重成負相關。然而，國內學者賴毓冕[16]的研究報道，新生兒出生體重受孕期母血Hcy水平影響，早產孕婦血漿Hcy水平升高會顯著增加分娩小于胎齡兒的危險。國外學者Yeter等[17]的研究結果亦發現胎兒生長受限組的產婦血漿Hcy水平與對照組相比顯著升高。但該兩項研究前者是通過研究早產孕婦血漿Hcy水平，后者則是在產后24 h內檢測的母血Hcy水平，與本研究方案均不一樣。近期韓國學者Choi等[18]的一項關于孕婦血清Hcy的前瞻性研究，通過監測孕早中晚期的血漿Hcy水平，并追蹤孕婦及新生兒結局，發現在孕期母血Hcy水平和孕產婦或新生兒結局之間未觀察到顯著的關聯。以上各個研究結果的不一致可能與血漿Hcy水平受影響因素多、研究對象背景不同、檢測方法不一致、孕期母血Hcy水平正常參考值不統一、高Hcy血癥定義無法界定有關。基于這一點，本研究認為，Hcy水平與新生兒出生體重的關系還需要進一步大樣本的研究來闡明。

通過本研究發現，葉酸代謝障礙中/高風險組的早產發生率高于無/低風險組，葉酸代謝高/中風險發生早產風險是低/無風險的1.8倍，且孕婦MTRR A66G基因型與早產存在顯著相關性;孕期母血Hcy水平與新生兒體重成正相關。因此，對于有葉酸缺乏，尤其伴有編碼MTRR的基因突變的孕婦建議及時補充葉酸，糾正葉酸缺乏，將有利于預防早產的發生，具有重要的優生學意義。

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（收稿日期：2018-08-31? 本文編輯：許俊琴）