PPARα激活保護小鼠急性肝衰竭對CHOP的調節(jié)作用研究

房忠軍， 徐 玲,2， 田 原,2， 靳海英， 時紅波,2， 任 鋒,2， 張向穎,2

1.首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院檢驗科，北京 100069； 2.北京市肝病研究所

急性肝功能衰竭(acute liver failure, ALF)是一種炎癥介導的肝細胞損傷過程，是由肝細胞凋亡和出血性壞死引起的臨床綜合征[1]。目前除肝移植外仍缺乏有效治療手段，因此其肝臟損傷發(fā)生的分子機制亟待探討。

內質網應激作為內源性凋亡通路之一，在炎癥反應及細胞凋亡調節(jié)方面均發(fā)揮著重要作用。內質網應激特異性凋亡蛋白CCAAT/增強子結合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)是一種轉錄因子，在內質網過度應激過程中激活并在內質網應激誘導的凋亡細胞死亡中發(fā)揮重要作用[2]，但其分子調控機制尚不明確。而過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptor alpha, PPARα)在調節(jié)脂質代謝[3]、細胞分化和凋亡[4]等方面均發(fā)揮著重要作用。本研究旨在探討PPARα信號分子是否通過CHOP參與了ALF中內質網應激誘導肝細胞凋亡。

1 材料與方法

1.1實驗材料健康C57BL/6小鼠，雄性，8～12周齡，體質量18～25 g，購自軍事醫(yī)學科學院，在北京市肝病研究所飼養(yǎng)，實驗前12 h和實驗期間禁食，自由飲水。Wy-14643(PPARα特異性激活劑)、D-氨基半乳糖(D-Galactosamine, D-GalN)和脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)購自美國Sigma公司。內質網應激特異性凋亡蛋白CHOP和β-actin兔抗單克隆抗體，以及辣根過氧化酶(horseradishperoxidase, HPR)偶聯(lián)的羊抗兔多克隆抗體均購自美國Cell Signaling 公司；PPARα多克隆抗體購自美國Abcam公司；增強化學發(fā)光試劑盒購自美國Thermo公司；蛋白定量試劑盒購自美國Bio-Rad公司，實時熒光定量PCR(quantitative real-timepolymerase chain reaction, qRT-PCR)試劑盒和Trizol試劑均購自美國Invitrogen公司。

1.2實驗方法

1.2.1 ALF模型的建立：C57BL/6小鼠腹腔注射D-GalN(700 mg/kg)和脂多糖(LPS，10 μg/kg)，6 h后模型建立，水合氯醛麻醉小鼠，留取血液和肝組織進一步檢測。……