IL-38及其受體IL-36R mRNA在結(jié)直腸癌中的表達及意義

張 瑜，金建軍，田笑笑

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 洛陽 471003

結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)是我國常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)生率和死亡率均高居第4位，僅次于肺癌、食管癌和胃癌[1]。大量證據(jù)證實，炎癥與CRC發(fā)病密切相關(guān)。常見的CRC相關(guān)炎癥因子包括：腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、白細胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、IL-8、IL-33和IL-1等[2-5]。IL-38作為IL-1家族中的新成員，不僅與炎癥有關(guān)，而且與肺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)[6-7]。本研究采用實時熒光定量PCR檢測IL-38 mRNA在CRC及癌旁正常組織中的表達，同時檢測IL-38受體IL-36R mRNA的表達，并探討兩者的相關(guān)性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本收集收集河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院普通外科CRC手術(shù)切除標(biāo)本62例，男36例，女26例，年齡(55.9±12.7)歲(41～72歲)。高-中分化腺癌38例，低分化腺癌24例。臨床Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期19例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。所有診斷均經(jīng)病理報告確診。手術(shù)切除癌組織同時取其5 cm以外的癌旁正常組織，液氮速凍，-80 ℃冰箱保存。

1.2主要儀器及試劑NanoDrop One超微量紫外分光光度計(賽默飛公司，美國)，ABI 7500熒光定量PCR儀(ABI公司，美國)。TRNzol試劑、反轉(zhuǎn)錄RT-PCR 試劑盒和SYBR Green 熒光定量PCR試劑盒均購自天根生化科技有限公司(北京，中國)。

1.3總RNA提取及cDNA合成取凍存組織100 mg，加入TRIzol試劑1 ml，按照試劑操作說明書提取總RNA，超微量紫外分光光度計檢測RNA濃度和純度。取500 ng總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作進行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA于-20 ℃保存。

1.4熒光定量PCR采用SYBR Green染料法進行實時熒光定量PCR以檢測目的基因IL-38和IL-36R mRNA 在62例CRC和對應(yīng)癌旁正常組織中的表達。參照文獻[8]設(shè)計引物：IL-38：5′-TTATCCTTGTGGGCTCAGTT-3′(上游)，5′-AATCCGTTCCCTTGGCTTTT-3′(下游)；IL-36R：5′-GCTGGAGTGTCCACAGCATA-3′(上游)，5′-GCGATAAGCCCTCCTATCAA-3′(下游)。利用管家基因GAPDH作為內(nèi)參照標(biāo)化IL-38和IL-36R基因的表達。……