鄧 峰, 繆小麗
重慶三峽中心醫院普外科,重慶 404000
胃癌在我國有著高發病率、高死亡率及低生存率的特點[1-2],并且由于早期篩查手段的不健全,許多患者診斷出胃癌時已經是進展期[3],從而使其成為嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一[4]。雖然胃癌的臨床治療手段在過去幾年內有所發展,但其術后5年生存率依然無顯著性提高[5-6]。因此,深入研究胃癌的發病機制及其預后的相關分子標志物對其預防和治療有重要意義。干擾素誘導跨膜蛋白(IFITM)在多種腫瘤組織中表達,其家族的3個成員IFITM1、IFITM2、IFITM3都由11號染色體對應的18 kb的基因組編碼,因此,具有高度同源性[7-8];其中IFIT1和IFITM3在胃癌中的作用已被揭示[9-10],但IFITM2與胃癌發展關系的研究尚少。所以,本研究主要探究IFITM2在胃癌中的作用及其與預后的關系。
1.1一般資料回顧性研究2010年6月至2012年6月在我院行手術治療的103例胃癌患者,男68例,女35例,年齡(55.66±8.50)歲(29~72歲),其中<60歲的患者有73例,≥60歲的患者有30例。腫瘤位于胃竇56例,胃體25例,賁門17例,胃底5例。所有患者術后組織病理學檢查均證實為胃癌。術后對所有患者隨訪5年。
依據IFITM2在胃癌中的表達量分為:750~940 pg/ml(高表達)、579~749 pg/ml(中表達)、230~578 pg/ml(低表達)3個區段[8],并研究這3個表達量區段與患者患者生存時間之間的關系。
1.2逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-qPCR)實驗利用總RNA提取試劑盒(QIAGEN,74104)提取所有患者癌組織與癌旁組織的總RNA,并運用逆轉錄試劑盒(QIAGEN,210210)將總RNA逆轉錄為cDNA。設計IFITM2基因上游引物序列:5′-TGTGCAAACCTTCTCTCCTGT-3′;下游引物序列:5′-TGTGGATCACGGTGGACATC-3′,對照基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)上游引物序列:5′-AAATCCCATCACCATCTTCCAGG-3′;下游引物序列:5′-AGATGATGACCCTTTTGGCTCCC-3′。分別用上述引物于熒光定量PCR儀進行擴增,擴增體系20 μl:SYBR Green Master Mix(2X) 10 μl,cDNA 1 μl,上、下游引物均為1.5 μl,ddH2O 6 μl。反應條件: 95 ℃ 1 min,95 ℃ 10 s, 55 ℃ 15 s(循環數為35)。qPCR結果統計:ΔCt=Ct目的基因-CtGAPDH,ΔΔCt=ΔCt 處理組-ΔCt對照組,mRNA相對表達量=2-ΔΔCt。……