下調KDM1A基因對結直腸癌細胞增殖、侵襲及AKT信號通路的影響

潘春鵬， 李 峰

上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院普外科，上海 200433

賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1, LSD1/KDM1A)作為胺氧化酶家族成員，是最早被發現的組蛋白去甲基化酶，可通過除去底物或組蛋白結構以外的甲基調控基因表達，參與細胞的增殖、侵襲和凋亡等生物學過程，因其在非小細胞肺癌、前列腺癌和舌癌等多種腫瘤組織或細胞中異常高表達，具有促進腫瘤發生、發展的作用而備受學者們的關注[1-3]。已有研究[4-5]證實，KDM1A在結直腸癌中異常高表達，發揮著促進腫瘤細胞生長的作用，但其具體的作用機制尚不明確。近年來研究[6-7]發現，KDM1A可負向調控AKT信號通路抑制腫瘤的發生、發展，但其有無通過介導AKT信號通路參與結直腸癌細胞的增殖和侵襲過程尚未可知。因此，本研究通過體外干擾結直腸癌HCT15細胞中KDM1A表達，探討其對細胞增殖、侵襲和AKT信號通路的影響，以期從KDM1A負向調控AKT角度揭示其對結直腸癌的抑制作用。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器LipofectamineTM2000轉染試劑、Trizol試劑、KDM1A小干擾RNA(si-KDM1A)和陰性對照(si-NC)購自美國Invitrogen公司。Opti-MEM培養基、胎牛血清、青鏈霉素和RPMI-1640培養基購自美國Gibco公司，MTT試劑購自美國Simga公司，逆轉錄試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒和蛋白提取試劑盒購自碧云天生物公司，化學發光試劑盒購自美國Bioworld公司，PI周期試劑盒購自聯科生物公司，RT-PCR試劑盒購自日本Takara公司，GAPDH抗體、p21抗體、Cyclin D1抗體、MMP-2抗體和HRP標記的羊抗兔二抗購自美國Santa Cruz公司，KDM1A抗體購自美國R&D公司。Transwell小室購自美國Millipore公司，CO2恒溫細胞培養箱購自美國Thermo公司， 倒置顯微鏡購自重慶光學儀器廠，酶標儀購自天津開元生物公司，流式細胞儀購自美國BD公司。……