賴氨酸對奶牛乳腺上皮細胞內乳蛋白合成相關基因表達和蛋白磷酸化的影響

陳 璐 趙艷麗 郭曉宇 史彬林 閆素梅

(內蒙古農業大學動物科學學院，呼和浩特 010018)

乳蛋白是牛奶的主要成分，是評價牛奶質量的重要指標。氨基酸(amino acid，AA)是合成乳蛋白的主要前體物，可以影響乳蛋白合成[1]。賴氨酸(lysine，Lys)是乳蛋白合成主要的必需氨基酸(essential amino acid，EAA)，也是奶牛的限制性氨基酸。因此，深入研究Lys對乳蛋白合成的影響及機理，對調節乳腺內乳成分的合成和改善乳品質具有重要意義。李沐陽等[2]研究發現，玉米秸稈飼糧條件下奶牛陰外動脈灌注氨基酸能促進乳蛋白合成。王立娜[3]以奶牛乳腺上皮細胞(bovine mammary epithelial cells，BMECs)為模型在培養基中添加EAA發現，乳蛋白的合成量增加了。Giallongo等[4]研究發現，奶牛灌注過瘤胃Lys后促進乳蛋白合成的同時，也改善了乳品質。可見，Lys在一定程度上影響了乳蛋白的合成，但前人的研究多集中在向奶牛體內灌注Lys影響乳蛋白合成的方面，對體外添加Lys影響乳蛋白合成及其機理方面的探索研究甚少，有必要對此進行深入試驗研究。鑒于此，本研究以BMECs為模型，研究不同濃度Lys對乳蛋白合成相關基因表達和蛋白磷酸化的影響，為進一步探討Lys對BMECs內乳蛋白合成的影響機理提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

Ⅱ型膠原酶、DMEM/F12培養基、胰島素轉鐵蛋白硒鈉、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)購自Gibco公司；Lys(貨號L8662)、氫化可的松、表皮生長因子、催乳素、瓊脂糖購自Sigma公司；RNAiso PLUS、PrimeScript RT Master Mix和SYBR Premix ExTaqTMⅡ購自TaKaRa公司；兔抗哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)抗體(貨號ab2732)、兔抗磷酸化mTOR抗體(貨號ab84400)、兔抗真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)抗……