針刺對急性離心運動后大鼠骨骼肌肌糖原的影響

黃巧婷

（成都大學 四川 成都 610106）

肌糖原是機體運動時骨骼肌收縮的主要能源物質(zhì)，長時間耐力運動易引起體內(nèi)肌糖原含量劇減、運動能力下降，引起機體產(chǎn)生運動性疲勞。針刺在緩解運動性疲勞方面已得到了國內(nèi)外多位學者的證實。顧一煌等發(fā)現(xiàn)力竭運動后艾灸足三里、關元穴等穴位小鼠骨骼肌內(nèi)肌糖原及肝臟中肝糖原含量顯著提高，且小鼠的力竭時間明顯延長，運動能力顯著提高。本研究通過針刺干預一次性力竭離心運動后大鼠的左側腿腓腸肌，探討針刺對長時間離心運動后肌糖原恢復的影響，以期獲得針刺對運動性疲勞恢復的相關機制。

1、研究對象與方法

1.1、研究對象

雄性健康SD大鼠，共24只，體重為215.8±14.2g，采用國家標準嚙齒類動物飼料分籠飼養(yǎng)，自由飲食。室溫控制在20±3℃，相對濕度維持在60%～75%，并保持12小時光照。

1.2、研究方法

1.2.1、動物分組與運動方式

大鼠先進行為期3天的適應性喂養(yǎng)，采用隨機數(shù)表法將大鼠隨機分為4組，每組6只，為安靜對照組，運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組。正式實驗前3天，運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組大鼠以10米/分，坡度為0°進行適應跑臺訓練（跑臺采用杭州段氏制作，型號：BCPT－98型）。大鼠開始正式實驗時，將運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組大鼠進行一次力竭性離心運動，運動后即刻對大鼠左側腿腓腸肌內(nèi)側進行針刺處理（方法：大鼠正臥位，取左側腿腓腸肌內(nèi)側進行斜刺進針，進針角度約為30°，留針5min）。運動模型參考Armstrong及田野所建立的離心運動模型，具體運動方案為：速度：25米/分、坡度：-16°，下坡跑直至力竭。

1.2.2 取樣

2%的戊巴比妥鈉按2.3 ml／kg體重進行腹腔注射麻醉，迅速分離腓腸肌內(nèi)側頭，并于冰上切取約3×3×5mm大小組織塊，投入事先放入液氮的正己烷內(nèi)，6s后迅速取出組織塊并用錫紙包好，轉至－80℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 免疫組化染色測肌糖原含量

取出凍好的組織塊樣本，于恒冷切片機內(nèi)切片，厚度為6μm，并按如下免疫組化染色流程進行染色。具體實驗流程：

1）冰凍切片，吹風機冷風吹干，Carnoy固定劑固定10min，PBS沖洗5min×3次；

2）0.5%高碘酸水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）5min, PBS漂洗5 min×3次；

3）Schiff試劑（現(xiàn)配現(xiàn)用）10min；

4）亞硫酸氫鈉溶液，5min×3次；

5）Mayer蘇木精復染30s；

6）流水沖洗5min；

7）樹脂封片。

光學顯微鏡采集圖像后用IPP-6.0軟件進行分析，獲取每組圖片與其陰性對照圖片對比后的平均光密度值，進而推算出每組大鼠肌糖原含量。

1.3、數(shù)據(jù)處理

所有實驗結果均采用SPSS19.0進行統(tǒng)計學處理，組間進行獨立樣本T檢驗。結果以平均數(shù)±標準差（x±s）表示，顯著性水平定為，非常顯著性差異為P〈0.01，顯著性差異為P〈0.05。

2、研究結果

2.1、各組大鼠腓腸肌肌糖原免疫組化結果

圖1 實驗各組腓腸肌αB-crystallin免疫組化圖例

圖注：圖中給出的是各組腓腸肌肌糖原橫切面免疫組化情況。A圖為陰性對照組；B圖為安靜對照組；C圖為運動后12h組針刺腿；D圖為運動后12h組非針刺腿；E圖為運動后24h組針刺腿；F圖為運動后24h組非針刺腿；G圖為運動后48h組針刺腿；H圖為運動后48h組非針刺腿。

實驗各組大鼠腓腸肌肌糖原含量變化見表1。急性離心運動后，隨著運動后時間的延長各組大鼠腓腸肌肌糖原含量逐漸增加。運動后24h組肌糖原含量與安靜對照組相比具有顯著差異（P〈0.05），運動后48h組肌糖原含量與安靜對照組相比具有非常顯著差異（P〈0.01）；運動后12h組針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿（P〈0.05），運動后24h組針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿（P〈0.01），而運動后48h組針刺腿肌糖原含量與非針刺腿相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 實驗各組大鼠腓腸肌肌糖原含量比較（n=6）

3、分析與討論

肌糖原作為骨骼肌收縮的主要能源物質(zhì)，骨骼肌中肌糖原含量的高低對機體運動能力起著重要作用，尤其是耐力性運動項目，肌糖原儲備是決定其運動能力的重要因素之一。長期離心運動會使機體內(nèi)的糖原含量急劇減少，機能下降，導致運動性疲勞的發(fā)生，影響運動訓練效果。本研究結果顯示，力竭離心運動后，隨著運動后時間的延長各組大鼠腓腸肌肌糖原含量逐漸增加。大鼠于運動后24h，腓腸肌內(nèi)肌糖原含量顯著高于安靜對照組，且以此趨勢持續(xù)至運動后48h（運動后48h組肌糖原含量顯著高于安靜對照組，P〈0.01）。提示大鼠在一次力竭離心運動后，腓腸肌肌糖原含量在運動后12h即出現(xiàn)了超量恢復。前蘇聯(lián)馬特維也夫教授于1950率先提出超量恢復理論，隨后得到了我國學者的普遍認同，廣泛應用到運動訓練實踐，并產(chǎn)生了較為深遠的影響。超量恢復是指機體在一定時間運動后，隨著恢復時間的延長，體內(nèi)的能源物質(zhì)如ATP、蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等不僅恢復到運動前水平，甚至超過原有水平的現(xiàn)象。大多數(shù)研究表明長時間耐力運動后，機體于運動后48h或更長時間體內(nèi)的肌糖原才能完全恢復，若運動后采取高糖膳食（碳水化合物的攝入量：500～600g），機體內(nèi)的肌糖原和肝糖原可在24h后完全恢復。本研究結果顯示，大鼠在一次力竭性離心運動后，在給予正常飲食的條件下，腓腸肌肌糖原可在運動后24h基本恢復完全。

力竭性離心運動后12h組與24h組大鼠針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿。而運動后48h，與非針刺腿相比，針刺腿腓腸肌肌糖原含量無明顯變化。陳佩輝等早期發(fā)現(xiàn)，針刺治療運動導致的骨骼肌損傷及DMOS（延遲性肌肉酸疼）效果非常顯著。盧鼎厚等通過大負荷運動后施予針刺干預來觀察骨骼肌內(nèi)部的結構變化，發(fā)現(xiàn)針刺對骨骼肌內(nèi)actin蛋白等的代謝具有顯著影響。提出針刺主要是通過調(diào)節(jié)或促進符合運動后骨骼肌收縮蛋白的變化，促使其合成代謝與分解代謝達到平衡來實現(xiàn)其加速恢復機體損傷的作用。但對于體內(nèi)肌糖原的變化，盧鼎厚老師并沒有給出相應結論。而本實驗發(fā)現(xiàn)，大負荷離心運動后，12h針刺腿大鼠腓腸肌肌糖原含量就已顯著高于安靜對照組，且該變化一直持續(xù)到運動后24h，但12h非針刺腿腓腸肌肌糖原含量與安靜對照組相比，卻無顯著差異，提示針刺可加速機體內(nèi)肌糖原合成，使超量恢復的時間提前。謝爾曼等研究表明，有效地運用超量恢復原理可以更高效的進行運動鍛煉以達到更好的運動效果。通常在機體超量恢復階段進行下一次運動訓練，其效果最佳，更有助于機體運動能力的提高。因為在這個階段，人體具有最豐富的能源物質(zhì)和機能水平，若適當?shù)募哟筮\動負荷便可促進機體形成更高水平的超量恢復。但下一次訓練時間太早或太遲，其訓練效果均會受到影響甚至無效。因此，當機體進行不同程度或目的的訓練時，應嚴格把控其間歇時間，如將下次訓練課內(nèi)容安排在機體超量恢復階段，以期將機體超量恢復水平發(fā)揮至最高。此外，田中等研究發(fā)現(xiàn)，機體在進行100米跑后，體內(nèi)的磷酸肌酸在運動后2～5min即可恢復完全甚至高于運動前水平，而長時間耐力運動后，機體內(nèi)肌糖原含量大約在運動后15min左右出現(xiàn)超量恢復。本研究結果顯示，一次力竭性離心運動后，腓腸肌內(nèi)肌糖原于運動后24h出現(xiàn)超量恢復，而針刺干預可將機體內(nèi)肌糖原的超量恢復時間提前至運動后12h，更有利于機體恢復。本研究的完成可為實際比賽及運動訓練時間的安排、運動性疲勞的緩解及恢復提供理論依據(jù)。

4、結論

針刺可通過內(nèi)源性作用機制促機體肌糖原的合成，使超量恢復的時間提前。