非小細胞肺癌治療中EGFR與VEGFR—2的臨床意義及相關性分析

顧晶晶 李珂珂

摘要 目的：探討非小細胞肺癌治療中EGFR與VEGFR-2的臨床意義及相關性。方法：收治非小細胞癌癥患者60例，記錄其年齡、性別、吸煙史、分化程度、病理類型等信息，通過液相芯片技術分析基因突變及VEGFR-2和EGFR水平。結果：EGFR基因19外顯因子突變和患者吸煙史有關，而EGFR基因21外顯因子突變和患者的病理類型、分化程度均有關，EGFE基因和VEGFR-2基因表達水平與患者病理類型、分化程度相關，EGFR和VEGFR-2表達水平有顯著相關性（P<0.05）。結論：對非小細胞肺癌治療中EGFR和VEGFR-2的相關性研究，對臨床治療和借鑒有非常重要的意義。

關鍵詞 非小細胞肺癌；EGFR；VEGFR-2；相關性

非小細胞肺癌有其特有的性質與特征，有諸多的相關因素，對其展開的臨床治療也應該從各個相關因素分析研究而攻破，對癥下藥，才能提高整體的治療效果以達到預期目標[1]。

資料與方法

2015年1月-2016年6月收治非小細胞肺癌患者60例。所有患者均沒有接受過靶向治療或放化療等抗癌治療，有完整的入院診斷資料，無其他合并腫瘤疾病情況。其中男33例，女27例，年齡<60歲者39例，>60歲者21例；16例患者有吸煙史；包括腺癌51例，鱗癌5例，腺鱗癌2例，大細胞癌l例和神經內分泌癌l例；有7例腫瘤細胞低分化患者，35例中分化患者以及18例高分化患者；根據2009年美國癌癥聯合委員會及國際抗癌聯盟聯合制定的分期標準判定TNM分期I期39例，Ⅱ期7例，Ⅲ期14例。

研究方法：①提取DNA：采用DNA提取試劑盒，提取組織切片標本基因組DNA，再采用分光廣度定量DNA濃度，確保樣本的濃度> 20ng/υL且總量>200ng。②聚合酶鏈式反應預擴增：委托相關單位合成引物，進行聚合酶鏈式反應預擴增，得到目標基因片段。具體過程為在95℃條件下預變性3min，94℃條件下變性30s，56℃條件下退火30s，72℃條件下反復延伸35次30s，最終保持72℃條件下延伸10min，存放于4℃條件環境下。③消化處理：通過核酸外切酶酶切和堿性磷酸酶水解，將多余引物與核苷酸消除，預防與其他物質結合。加入PCR擴增產物到PCR管內，對應反應參數為37℃條件下持續30min，80℃條件下持續20min，存放4℃環境中[2]。④等位基因特異引物延伸反應：根據特定性序列能特異識別方法對等位基因型進行識別，確保延伸引物能與酶切產物結合并形成延伸產物。具體步驟：96℃條件下預變性2min，打開DNA雙鏈，94℃條件下變陛30s，52℃條件下退火lmin，74℃條件下延伸2min，依次進行40次。⑤雜交反應：混合微球與雜交液混合液30s，確保其充分混合后放入96孔板當中，加入ASPE產物產生雜交反應，再加入SA-PE孵育，確保引物的Tag序列標簽和聚苯乙烯微球的Anti-Tag序列互補配對。⑥讀取數據：采用Lummex閱讀儀讀取和分析數據，根據樣品中位熒光值確定基因突變的情況。最后還要采用分支-DNA液相芯片法檢測組織樣品的基因表達水平。

統計學方法：采用SPSS 21.0統計學軟件處理分析，建立并錄入數據信息到數據庫，采用X2檢驗基因突變與臨床因素之間的關系，基因表達關系系數通過R表示，分析與各因素間的相關程度，P<0.05為差異有統計學意義。

結果

EGFR基因、VEGFR-2基因表達水平和患者的關系：ECFE基因和VECFR-2基因表達水平與患者病理類型、分化程度相關（P<0.05），見表l。

EGFR基因和VEGFR-2基因表達水平相關性分析：EGFR和VEGFR-2表達水平有顯著相關性（P<0.05），見表2。

討論

從相關性因素方面來看，有研究結果顯示發生EGFR突變在性別和病理類型方面差異均存在統計學意義[3]，有女性突變高于男性的結論，非吸煙者的突變率比吸煙者的概率更高。在本研究顯示的數據為無吸煙史的患者發生基因突變的概率接近35%，而吸煙者僅6%，差距明顯，證實兩者之間存在相關性（P<0.05）。此外，突變因子還與患者的病理類型及分化程度有關（P<0.05），均在本研究中證實，但卻與患者性別無關，這是與其他研究者研究結果不相符的方面，原因可能與統計對象的基因突變亞型相關。

VECF即血管內皮細胞生長因子在腫瘤血管生成過程中發揮重要的調控作用。VECFR-2是受體VEGFR家族五大成員之一，其由激酶插入區受體基因編碼，于患者血管內皮細胞與淋巴內皮細胞中存在。不少研究均顯示其在介導VEGF信號轉導導致的腫瘤血管生成中發揮主導作用，此外還能對血管內皮細胞增殖、誘導血管平滑肌細胞遷移以及血管構建、加速基底膜水解等進行調控。此外，臨床還發現靶向藥物在其中應用的重要性，為癌癥患者的治療提供了新的方向，將分子靶向藥物進行合理的聯用或許能為臨床帶來更好的效果，有所期待。

綜上所述，對于腫瘤生長而言，ECFR與VEGF信號通路都有著非常重要的作用，能為其臨床治療提供重要的借鑒價值和意義。

參考文獻

[1]肖旺.早期非小細胞肺癌ECFR/KRAS/BRAF突變的初步臨床研究[D].南方醫科大學，2015.

[2]石丹.非小細胞肺癌EGFR突變與CST-π高表達與臨床參數的關系及預后[D].南昌大學，2013.

[3] 白曉燕.Hedgehog信號通路在EGFR-TKI敏感和耐藥非小細胞肺癌細胞中的作用機制研究[D].南方醫科大學，2013.