SLE患者外周血單個核細胞miR-21、miR-155表達變化及其機制

喻少波，范小杰，周子朋，朱建新

(1 常州市第一人民醫院，江蘇常州 213003；2 河南省中醫院)

系統性紅斑狼瘡(SLE)是臨床較為常見的自身免疫性疾病，具有臨床表現復雜、易累及多臟器系統的特點，其主要的免疫性特征是B淋巴細胞異常活化、大量自身抗體產生以及免疫復合物沉積[1，2]。SLE的具體發病機制尚未完全明確，臨床治療急性活動期SLE主要以誘導緩解、控制病情為主，待病情穩定后予以維持治療[3]。糖皮質激素和免疫抑制劑是目前治療SLE的主要藥物，不但可增加患者感染風險，還會因感染而加劇病情[4]。尋找新的SLE治療或監測靶點是目前臨床研究的熱點。微小RNA-21(miR-21)和微小RNA-155(miR-155)是近年研究較多的兩個免疫相關微小RNA。本研究探討miR-21、miR-155在SLE發生、發展中的作用及其機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月～2017年9月常州市第一人民醫院收治的SLE患者45例(SLE組)。納入標準：①符合1997年美國風濕病學會SLE診斷標準[5]；②年齡>18歲；③臨床資料完整。排除標準：①有其他風濕性疾病；②合并其他全身性疾病；③妊娠期或哺乳期婦女；④伴神經系統疾病或交流溝通障礙。根據中華醫學會風濕病學分會《系統性紅斑狼瘡診斷及治療指南》[6]，患者病情為輕度24例，男4例、女20例，年齡20～68(38.52±11.57)歲；病情為中重度21例，男4例、女17例，年齡19～71(39.65±12.33)歲。另取同期在該院體檢的健康者30例作為對照組，男3例、女27例，年齡22～69(38.15±11.62)歲。兩組性別比例、年齡具有可比性。本研究已獲常州市第一人民醫院醫學倫理委員會批準，入組者均簽署知情同意書。

1.2 外周血單個核細胞miR-21、miR-155及骨形成蛋白2(BMP-2)、骨形成蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)mRNA檢測 采集兩組清晨空腹靜脈血6 mL，用梯度離心法分離外周血單個核細胞，用PBS重復洗滌3次，收集貼壁細胞，置入RPMI 1640培養液，37 ℃、5% CO2條件下培養。采用實時熒光定量PCR法檢測兩組外周血單個核細胞中miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡmRNA。miR-21、miR-155、BMP-2、BMPRⅡ及內參U6上下游引物均由Realgene公司設計合成。 PCR反應條件：94 ℃預變性60 s，94 ℃、45 s，56 ℃、30 s，74 ℃、30 s，共36個循環。采用2-ΔΔCt計算miR-21、miR-155、BMP-2 mRNA、BMPRⅡ mRNA相對表達量。分析SLE患者miR-21、miR-155相對表達量與BMP-2、BMPRⅡ相對表達量的關系。

2 結果

2.1 兩組外周血單個核細胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量比較 SLE組外周血單個核細胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量均高于對照組(P均<0.05)，其中中重度患者高于輕度患者(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組外周血單個核細胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量比較

注：與對照組比較，#P<0.05；與同組輕度者比較，*P<0.05。

2.2 SLE患者外周血單個核細胞miR-21、miR-155 mRNA與BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量的關系 Pearson相關分析顯示，miR-21 mRNA與BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量均呈正相關(r分別為0.532、0.618，P均<0.05)，miR-155 mRNA與BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量均呈正相關(r分別為0.552、0.649，P均<0.05)。

3 討論

SLE患者普遍存在T細胞、B細胞活化異常，患者體內出現多種自身抗體。有研究認為，BMP通過作用于細胞膜上的受體，可參與B細胞分化，抑制B細胞成熟，其中BMP-2、BMPRⅡ是重要的受體類型，通過與BMP形成復合物，可發揮絲/蘇氨酸激酶活性[13]；同時BMP信號通路可參與T細胞應答，進而影響T細胞功能。在SLE患者中，BMP通路下游Olf-1/EBF中Id3基因及相關鋅指蛋白基因(OAZ)表達在骨髓及外周血單個核細胞中均升高，其與RNA相關抗體水平及疾病活動指數呈負相關，阻斷OAZ后，患者Id3基因表達明顯下降，隨之降低抗核抗體的表達，提示BMP通路異常活化在SLE發病過程中發揮重要作用，可引起T細胞、B細胞功能失調[8]。miRNA是具有調節功能的一類小分子非編碼RNA，在生命進程多個環節中均發揮著至關重要的作用，可通過對免疫細胞分化與信號傳導等過程進行調節，實現對免疫系統的調控[9，10]。miR-21是主要由活化的T細胞及B細胞產生的小分子RNA，在多種免疫性疾病的發生、發展過程中起重要作用。國外學者[15]將BMP與人體肺動脈平滑細胞結合，培養24 h后，經基因芯片分析發現miR-21表達水平明顯升高，說明經BMP刺激后，磷酸化R-Smad蛋白并進入核內，其MHI結構區域通過與pri-miRNA結合，促進其向pre-miRNA轉化，進而影響疾病發生[11]。而miR-155是BIC基因的表達產物，與機體免疫功能密切相關，趙靜等[16]研究表明，miR-155可參與B細胞增殖、分化，同時通過調節C-MAF等基因表達，可調控T細胞分泌的細胞因子[12]。陳芳等[13]研究發現，SLE重度活動期miR-155較穩定期上調；陳京京等[14]研究發現，中重度活動組SLE患者miR-21、miR-155表達均較輕度患者升高；提示外周血B細胞中miR-21、miR-155異常表達在SLE發生、發展過程中發揮重要作用。本研究結果顯示，SLE組外周血單個核細胞中miR-21、miR-155 mRNA表達明顯高于對照組，且中重度者高于輕度者，與上述報道相符。證實miR-21、miR-155在SLE的發生、發展中起重要作用，其高表達可加重病情。本研究結果顯示，SLE組外周血B細胞中BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量均明顯高于對照組，且中重度組>輕度組>對照組，說明SLE患者BMP信號通路異常活化，導致B細胞失控，與文獻報道相符[15]。本研究相關性分析顯示，SLE患者miR-21、miR-155 mRNA表達與BMP-2、BMPRⅡ mRNA相對表達量均呈正相關。提示miR-21、miR-155與BMP-2、BMPRⅡ均參與了SLE的發生、發展過程，miR-21、miR-155可能通過BMP通路參與SLE的發生、發展。

綜上所述，miR-21、miR-155高表達可促進SLE的發生及發展；其機制可能為活化BMP信號通路，促進BMP-2 及BMPRⅡ 表達。

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