PSEN1基因甲基化與散發(fā)阿爾茨海默病的相關(guān)性研究

魏珂　李瑋

【摘要】目的：探索早老素1（PSEN1）基因甲基化以及散發(fā)性阿爾茨海默病（SAD）之間的相關(guān)性。方法：選取2016年3月至2017年3月間的60例SAD患者納入觀察組，另選取同時(shí)期的60例健康對(duì)照者，分別應(yīng)用MassARRAY質(zhì)譜定量檢測(cè)其PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化率，并進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果：觀察組患者PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)在的甲基化率均明顯低于對(duì)NCg（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組患者隨著年齡的增長(zhǎng)，PSEN1基因甲基化率逐漸降低（P<0.05）。結(jié)論：PSEN1基因甲基化與散發(fā)阿爾茨海默病發(fā)病之間有密切的相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】PSEN1基因；散發(fā)阿爾茨海默病；甲基化；相關(guān)性

引起老年性癡呆的最重要原因之一是阿爾茨海默病（Alzheimer disease，AD），散發(fā)性阿爾茨海默病（SAD）是AD之中較為常見(jiàn)的一種，以記憶障礙、失語(yǔ)、失用、失認(rèn)、執(zhí)行功能障礙、人格及行為改變等為特征性表現(xiàn)。近年來(lái)，關(guān)于SAD的基因?qū)W研究有了較大的進(jìn)展，現(xiàn)已證明基因遺傳學(xué)因素在其發(fā)病中占據(jù)重要的位置，其中關(guān)于早老素1（PSEN1）基因的研究是熱點(diǎn)之一，但關(guān)于其與散發(fā)阿爾茨海默病的相關(guān)性還沒(méi)有得到足夠深入的認(rèn)識(shí)。本研究著眼于檢測(cè)SAD患者PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的特點(diǎn)，試圖闡述其與散發(fā)阿爾茨海默病之間的關(guān)系，為今后的臨床診治提供參考依據(jù)。報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月至2017年3月間本院神經(jīng)內(nèi)科門診及病房的60例SAD患者，并將其納入觀察組，另選取同時(shí)期本院體檢中心的60例健康對(duì)照者，納入對(duì)照組。對(duì)照組患者中，男性32例，女性28例，患者平均年齡（67.24±6.17）歲，其中<65歲18例、65～70歲27例、>70歲15例；簡(jiǎn)易精神量表（MMSE）評(píng)分[2]均>28分，排除記憶障礙、智力缺陷病例。觀察組中，男性33例，女性27例，患者平均年齡（66.83±7.81）歲，其中<65歲20例、65～70歲24例、>70歲16例；均符合美國(guó)阿爾茨海默病協(xié)會(huì)關(guān)于AD的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除一級(jí)親屬中有相關(guān)疾病患者。兩組患者均簽署知情同意書，在年齡、性別、文化水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

抽取兩組患者靜脈血10mL，枸櫞酸葡萄糖抗凝后采取鹽析法將DNA進(jìn)行提取，分別應(yīng)用MassARRAY質(zhì)譜定量檢測(cè)其PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化率。DNA甲基化修飾試劑盒廠家為Epigentek公司，Massarray點(diǎn)樣及芯片儀、PCR儀、熒光分析儀等為Sequenom公司產(chǎn)品。所有樣本采集及DNA提取、引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄、點(diǎn)樣及質(zhì)譜檢測(cè)等均由同一專業(yè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員嚴(yán)格按照操作規(guī)程和儀器、試劑盒說(shuō)明書完成。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 17.0軟件，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)均用n/%表示，組間采用X²檢驗(yàn)，若P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

觀察組患者PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)在-173、-95和+76的甲基化率均低于對(duì)照組，其中在-173的甲基化率組間存在明顯差異（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組患者隨著年齡的增長(zhǎng)，PSEN1基因甲基化率逐漸降低（P<0.05）。詳見(jiàn)表1、表2所示。

3討論

近年來(lái)，阿爾茨海默病的遺傳學(xué)研究逐漸深入，其中有針對(duì)遺傳性阿爾茨海默病患者的研究表明，基因組完全一致的單卵孿生子的AD發(fā)病年齡以及臨床癥狀并不完全一致，顯示出尚有其他遺傳學(xué)機(jī)制在阿爾茨海默病發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。表觀遺傳學(xué)作為遺傳學(xué)中一個(gè)較為前沿的分支，通過(guò)對(duì)DNA甲基化、組蛋白修飾以及非編碼RNA的研究，為解答上述問(wèn)題提供了新的思路。DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)中最常見(jiàn)的一種改變方式，其主要發(fā)生位置在DNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)附近的胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸（CpC）島中的胞嘧啶堿基。

關(guān)于表觀遺傳學(xué)與散發(fā)阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系，目前的研究和認(rèn)識(shí)還不夠深入。本研究通過(guò)對(duì)60例散發(fā)性阿爾茨海默病患者以及60例正常體檢者外周靜脈血中PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)（-288至+101）甲基化程度進(jìn)行檢測(cè)，旨在探索PSEN1基因甲基化模式改變與散發(fā)性阿爾茨海默病發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。以往的研究文獻(xiàn)闡明PSEN1基因啟動(dòng)子區(qū)有不同的甲基化位點(diǎn)，且多數(shù)位點(diǎn)的甲基化水平均較低下，本文研究表明，在PSEN1基因啟動(dòng)子的-173位點(diǎn)，觀察組甲基化率對(duì)比對(duì)照組存在著明顯的降低（P<0.05）。本研究還探討了SAD患者PSEN1甲基化率與年齡分布的相關(guān)性，結(jié)果提示SAD患者PSEN1基因平均甲基化率隨著年齡的增加而呈顯著降低趨勢(shì)（P<0.05）。由于高齡是阿爾茨海默病的重要危險(xiǎn)因素之一，由此大體能推測(cè)PSEN1甲基化模式的改變可能與散發(fā)阿爾茨海默病的發(fā)病存在一定的相關(guān)性。