CD146、SP70在卵巢上皮性癌組織中的表達及意義

姬榮偉,田劉曼,陳 敏,劉 芳,裴巧麗

1.西電集團醫院病理科(西安 710077),2.西北婦女兒童醫院婦五科(西安710061),3.陜西中醫學院附屬醫院病理科(咸陽712000),4.陜西中醫學院第二附屬醫院病理科(咸陽712000),5.陜西中醫學院第二附屬醫院綜合婦產科(咸陽712000)

卵巢癌是一類最普遍的嚴重威脅婦女生命的惡性生殖器官腫瘤之一。其發病率位于女性生殖系統腫瘤第3位，僅次于宮頸癌和宮體癌，然而其病死率位居第1位。由于卵巢癌深居盆腔，缺乏有效的早期診斷方法，大約70%患者發現時已達晚期，使得卵巢癌5年存活率低[1]。有報道指出卵巢癌組織學類型分為很多種，其中約90%為上皮性腫瘤[2]。CD146分子自在黑色素瘤細胞中首次發現以來,研究人員又在肝癌等其他腫瘤組織中發現CD146分子存在高表達，而在對應的正常組織中低表達[3]。有研究證實CD146可以通過介導腫瘤細胞間、腫瘤-血管內皮細胞間的粘附來促進腫瘤的生長和血道轉移，可以作為腫瘤進展和轉移的標志。SP70是一種非小細胞肺癌的相關標志物，前期研究發現該蛋白的表達與肺癌及胰腺癌的臨床病理學特征和預后密切相關[4-5]。目前，CD146、SP70分子表達在卵巢上皮性癌中的研究鮮見報道。為此，本研究主要探討CD146、SP70在卵巢上皮性癌組織中的表達及其臨床意義，為臨床診斷及治療提供理論指導。

資料與方法

1 一般資料 收集2014-2016年間西電集團醫院病理科的100例卵巢上皮性癌組織標本，50例卵巢上皮良性腫瘤組織標本和同期于西電集團醫院因子宮脫垂手術切除的50例正常卵巢組織標本。100例卵巢上皮性癌患者中70例為漿液性囊腺癌、30例為黏液性囊腺癌，年齡38～76歲,中位年齡52歲，按國際婦科聯盟(FIGO)的標準對患者進行手術分期：Ⅰ～Ⅱ期68 例，Ⅲ～Ⅳ期32例。50例卵巢上皮性良性腫瘤組織中包含漿液性囊腺瘤27例、黏液性囊腺瘤23例, 年齡28～60歲,中位年齡44歲。50例因子宮脫垂手術切除的正常卵巢組織標本，年齡47～77歲,中位年齡61歲。所有納入本次研究的婦女在年齡、初潮年齡、產次、孕次方面經統計學處理差異均無統計學意義(P>0.05)。納入標準：所有患者的臨床標本均經過HE染色后，由兩名以上經驗豐富的病理醫師雙盲閱片證實，均符合卵巢上皮性癌或者卵巢上皮性良性腫瘤的診斷標準。患者手術前均未經過放、化療、內分泌治療或生物免疫治療等治療;患者及家屬知曉研究內容和治療風險，同意配合治療研究，并簽訂知情同意書。排除標準：患者手術前有過放療、化療、內分泌治療或生物免疫治療的病史；存在心肺功能異常、肝腎功能異常等嚴重內外科疾病的患者；患有嚴重精神障礙，無法配合研究者。

2 研究方法 ①病理學檢測：所有收集的組織樣本均采用SP免疫組化的方法，檢測CD146和SP70在相關卵巢組織中的表達。所有標本均經4%多聚甲醛液固定、石蠟包埋，德國Leica輪轉式切片機RM2235，取4 μm連續切片5張。所用試劑盒為國產邁新即用型快速免疫組化MaxVisionTM檢測試劑盒(KIT-5002)按說明書嚴格操作，陰性對照用5%羊血清代替一抗，顯微成像系統攝片。②免疫組化染色：切片按固定、烘烤、脫蠟、梯度酒精水化、3%過氧化氫-甲醇封閉內源性過氧化物酶、PBS洗片、抗原修復、封閉、一抗4 ℃過夜、二抗及DAB顯色等常規組化步驟進行染色。免疫組化陽性：細胞核或細胞漿內呈棕黃色顆粒或團塊；免疫組化陰性：細胞核或細胞漿內無棕黃色顆粒或團塊出現。

3 觀察指標 由資深病理醫生采用雙盲法對實驗結果進行統計評分，評分為腫瘤細胞染色強度和陽性范圍評分之積。染色強度評分：無色,0分；淺黃色,1分；黃色,2分；棕褐色,3分。陽性細胞染色范圍：高倍鏡下每張切片隨機選取5個視野，染色范圍小于25%計為0分(-)，25%<染色范圍<50%者為1分(+)；染色強，染色范圍>75%者為()為3分；介于(+)和()之間為()為2分。最終評判的標準為：染色強度與染色范圍評分之積大于等于1者為陽性表達。

4 統計學方法 本研究應用SPSS 21.0統計學軟件包進行統計學分析，計數資料采用百分位數(n，%)表示，選擇χ2檢驗進行數據比較。以P<0.05時表示差異具有統計學意義。

結 果

1 不同卵巢組織中CD146和SP70的表達情況 CD146、SP70表達均以細胞漿中出現棕黃色顆粒或團塊為陽性反應，但CD146陽性也位于細胞膜及新生的毛細血管內皮細胞上,見圖1～2。CD146及SP70在正常卵巢組織中的陽性表達(4.0%、8.0%)和卵巢上皮良性腫瘤的陽性表達(18.0%、26.0%),低于卵巢上皮癌組織中的陽性表達(82.0% 、77.0% )(P<0.05)，見表1。

A：卵巢癌();B：卵巢癌()圖1 SP70在卵巢上皮癌組織中的表達(免疫組織化染色，×400)

A：組織標本1；B:組織標本2。紅色箭頭表示卵巢癌(),藍色箭頭表示血管內皮細胞(+)圖2 CD146在卵巢上皮癌組織中的表達(免疫組織化染色，×400)表1 不同卵巢組織中CD146和SP70的表達情況

類 別n CD146陽性(例)陰性(例)陽性率(%) SP70陽性(例)陰性(例)陽性率(%)卵巢上皮性癌組100 821882 772377卵巢上皮良性腫瘤組50 94118* 133726*正常卵巢組織組50 2484*△ 4468*△

注：與卵巢上皮性癌組比較，*P<0.05；與卵巢上皮良性腫瘤比較，△P<0.05

2 卵巢上皮性癌組織中CD146、SP70表達與臨床病理特征的關系 見表2。卵巢上皮性癌組織中CD146和SP70在年齡、瘤體大小、淋巴結轉移與否方面的陽性表達差異無統計學意義(P>0.05)。在不同的卵巢癌病理類型中，CD146的表達差異沒有統計學意義(P>0.05)，而SP70的陽性表達差異具有統計學意義(P<0.05)。在中低分化水平的癌組織中CD146和SP70的陽性表達率明顯高于高分化者，差異有統計學意義(P<0.05)；在 FIGOⅠ～Ⅱ期卵巢癌中 CD146和SP70表達的陽性率明顯低于FIGOⅢ～Ⅳ期，且差異具有統計學意義(P<0.05)。

表2 卵巢上皮性癌組織中CD146、SP70表達與臨床病理特征的關系

討 論

卵巢癌(Ovarian cancer,OC)是一類常見的婦女生殖系統惡性腫瘤,發病率呈逐年上升趨勢。根據組織來源不同，卵巢癌可劃分為卵巢上皮性腫瘤、性索-間質腫瘤、生殖細胞腫瘤和轉移性腫瘤，其中90%左右為卵巢上皮性腫瘤。雖然其發病率僅次于宮頸癌和子宮內膜癌，但其病死率卻常年占據婦科惡性腫瘤之首，使得針對卵巢上皮性癌的發生發展研究刻不容緩[6]。然而由于卵巢深藏于盆腔，加之其發病過程極其隱匿，無明顯的早期癥狀，使得其早期的病變難被察覺，同時，由于缺乏敏感性高和特異性強的篩查手段，所以對其早期診斷非常困難，故臨床上多數卵巢癌患者發現時已為晚期(FIGO分期Ⅲ期和Ⅳ期)[7]。因卵巢癌具有早期轉移、復發和化療耐藥的特性，使其在臨床上的診斷和治療都非常棘手。目前對于卵巢上皮性癌的治療主要采用手術聯合一線鉑類化療藥的治療方式，大部分的病人對初始治療有反應，然而70%以上的病人到最后都會復發，其5年生存率僅為30%左右[8]。由于目前卵巢上皮性癌的發生發展及轉移機制等尚未明確，使得臨床上沒有有效的早期篩查手段，因此積極探索新的高敏感度和特異性的生物標記物對提高卵巢上皮性癌的診斷、治療及預后判斷具有重要臨床意義[9]。

CD146是一個由16個外顯子組成的單數拷貝基因，其編碼的是一個單鏈的跨膜性糖基化蛋白。CD146通過加強細胞與細胞間、細胞與胞外基質間的相互作用，有利于細胞局部粘連聚集、骨架重構，從而對維持細胞形態、調控細胞游走、增殖及侵襲轉移發揮重要作用。同時在參與多種生理、病理生理進程，加強細胞之間聯系、維持細胞間通訊、維持組織形態等方面亦發揮著重要作用。研究表明，CD146在尿路上皮癌、子宮內膜癌、子宮內膜間質肉瘤、黑色素瘤等多種惡性腫瘤組織中均存在高表達，且其表達與病理分級、組織學分化程度、臨床分期高低、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移和癌癥復發等臨床病理特征息息相關，提示其與腫瘤發生發展，復發轉移以及轉歸的密切關系[10]。另有研究結果表明CD146可作為VEGFR-2的共同受體促進血管內皮細胞遷移和微小血管的形成，為腫瘤的生長和轉移提供必要的條件和營養。以上研究均提示CD146有可能是卵巢上皮性癌的診斷、靶向治療及預后評判的潛力分子[11]。

以往研究表明SP70與非小細胞肺癌、胰腺癌的發生、發展和預后密切相關，證實其可作為肺癌的可靠的腫瘤標志物[12-13]，具備作為一種新的腫瘤診斷與治療的理想靶標的轉化價值[14]。然而對于SP70在女性生殖系統相關腫瘤中的研究鮮見報道。

本研究首次在卵巢上皮性癌患者中聯合檢測CD146與SP70兩項分子指標，并證實CD146與SP70在正常卵巢組織中和卵巢上皮良性腫瘤中的陽性表達顯著低于卵巢上皮癌組織中的陽性表達；CD146和SP70在年齡、瘤體大小、淋巴結轉移與否方面的陽性表達不具有統計學差異；在不同的病理類型中，CD146的表達無統計學差異而SP70的陽性表達具有顯著的統計學差異；此外，我們發現分化水平越高和FIGO分期越低，CD146和SP70陽性表達率越低，且差異具有統計學意義。本研究的開展在以往研究基礎上揭示了CD146和SP70的表達與卵巢上皮性癌的進展存在密切聯系，進一步肯定了將CD146和SP70的聯合檢測用于診斷和治療卵巢上皮性癌以及判斷其預后的轉化潛力。為卵巢上皮性癌的診療方法的革新提供了新的理論依據。

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