慢病毒介導的脯氨酰寡肽酶過表達對大鼠肝星狀細胞功能的影響

周 達， 王 晶， 何玲楠， 李夢婷， 孫 超， 陳源文， 范建高

上海交通大學醫學院附屬新華醫院消化內科，上海 200092

脯氨酰寡肽酶(prolyloligopeptidase，POP，EC 3.4.21.26)是一種能特異性水解短肽中脯氨酸殘基羧基端肽鍵的絲氨酸蛋白酶，在體內發揮重要生理功能，參與多肽的生成與代謝、調控細胞增殖與分化、調節體內炎癥代謝等[1-3]；但是，POP在外周組織中的具體生物學作用仍未知。肝臟中POP活性很高，提示其在肝內生物學功能值得探索[4-6]。同時已有研究[7]發現，POP參與肝內炎癥及肝細胞增殖與分化。我們前期實驗發現，POP水解胸腺素β4(thymosin β4，Tβ4)產物N-乙酰基-絲氨酸-天冬氨酸-賴氨酸-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline，Ac-SDKP)具有抑制肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSC)活性和抗肝纖維化作用[8-9]；其他研究人員發現，Tβ4對四氯化碳誘導急性肝毒性有保護作用同時可以抑制HSC活性[10-11]。然而，POP在HSC內具體功能尚不明確。

肝纖維化主要表現肝內炎癥及細胞外基質沉積，HSC起至關重要的作用[12-13]。本研究旨在以HSC作為切入點，通過攜帶POP基因的慢病毒感染HSC-T6，探討POP在HSC內的生物學功能，進一步闡明POP在肝臟炎癥與纖維化發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1細胞培養大鼠肝星狀細胞系HSC-T6細胞購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。HSC-T6根據需要以適當密度接種于不同大小培養皿中，培養液為質量濃度為100 g/L的FBS/DMEM培養基(血清及培養基均購自Gibco，USA)，置于含體積分數為5%的CO2孵育箱中，在細胞處于良好生長狀態時進行下述相關實驗。

1.2攜帶POP基因的慢病毒感染HSC通過PubMed搜索大鼠POP基因(Prep，NM_031324)，設計攜帶POP和綠色熒光蛋白(GFP)基因的慢病毒(POP-virus)及空載病毒(Mock-virus)，并由上海吉凱基因化學技術有限公司合成；……