大鼠肝內淋巴細胞的分離與培養

張曼卡，馬慧敏，張 健，李玉鳳，葉小慧，李 鑫,

1.北京大學地壇醫院教學醫院中西醫結合中心，北京 100015；2.首都醫科大學附屬北京地壇醫院中西醫結合中心；3.首都醫科大學附屬北京地壇醫院傳染病研究所；4.北京大學地壇醫院教學醫院傳染病研究所

自身免疫性肝炎是一種病因未明、病理機制十分復雜的慢性肝臟炎癥性疾病,其主要表現是肝功能異常、免疫球蛋白升高、自身抗體陽性及特異的肝臟組織病理學異常改變[1-3]。其發病機制被認為是肝臟的促炎和抗炎機制的失衡所致。它是由于環境觸發作用于遺傳上的易感人群，導致T細胞介導的免疫應答直接作用于肝臟細胞的抗原[4]。因此，能夠對肝內淋巴細胞亞群進行分析對闡釋這一疾病的復雜病理機制顯得至關重要。然而，目前尚未有專門的肝內淋巴細胞分離培養方法。因此，本研究旨在通過建立一種較為簡便且具有很高重復性的提取大鼠肝內淋巴細胞的方法，為進一步研究肝臟免疫疾病奠定實驗工作基礎。

1 材料與方法

1.1材料無特殊病原體級大鼠，體質量250～350 g, 雌雄不限，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。大鼠實驗前12 h禁食、不禁水。本研究在北京地壇醫院動物實驗倫理委員會批準下進行。1640培養基(Gibco，1868632)、胎牛血清(Biology Industries，1616316)、L型-谷氨酰胺 (Amresco生物公司)、淋巴細胞分離液(Lymphoprep公司，12GES16)、Cell Strainer(BD公司)、一次性留置針(金環，29S0301)、PERCP標記抗大鼠CD3抗體(ebioscience,4289855)，蔡司(ZEISS)倒置熒光顯微鏡、Eppendorf高速冷凍離心機。

1.2方法

1.2.1 大鼠原代肝淋巴細胞的分離與培養: 主要包括灌肝、研磨、純化及培養等步驟, (1)灌肝: 取體質量為345 g的無特殊病原體級SD大鼠1只, 術前12 h禁食、不禁水；……