5-氮雜-2-脫氧胞苷及曲古抑菌素A對人胃癌SNU-1細胞系中DLC-1基因啟動子甲基化及mRNA表達的影響

賈 皚，秦 潔，任 莉，范修德

西安交通大學第一附屬醫院 1.消化內科； 2.感染科，陜西 西安 710061

胃癌的病因復雜，其發生、發展是一個多因素參與的多階段復雜過程，抑癌基因啟動子區甲基化成為胃癌發生、發展的早期事件。抑癌基因表達量減少是發生胃癌的關鍵性因素[1]。DLC-1基因是與胃癌相關的重要抑癌基因之一，DLC-1基因的缺失表達與胃癌的發生、發展有密切關系[2]。本實驗選擇抑癌基因DLC-1為研究靶點，以人胃癌SNU-1細胞株為研究對象，應用甲基化特異性聚合酶鏈式反應(methylation-specific-polymerase chain reaction, MSP)和實時熒光定量PCR的實驗方法，分析5-Aza-dC和曲古抑菌素A (trichostatin A, TSA)對DLC-1基因在胃癌細胞SNU-1中的甲基化水平和mRNA表達的影響，為5-Aza-dC和TSA應用于胃癌的臨床治療提供新的線索。

1 材料與方法

1.1一般材料細胞株：人胃癌SNU-1細胞株購自ATCC庫。5-Aza-dC、TSA(Sigma公司，美國)。基因組DNA提取試劑盒(OMEGA公司，美國)。重亞硫酸鹽修飾試劑盒(MILLIPORE公司，美國)。RPMI 1640培養基干粉、胎牛血清(Gibco公司，美國)；DMSO(北京索萊寶科技有限公司，中國)、引物合成(南京金斯瑞科技有限公司，中國)；Tap Mix(熱啟動Taq酶)、6×DNA上樣緩沖液、DNA marker、6×DNA上樣緩沖液(北京天根生物科技有限公司，中國)。

1.2方法

1.2.1 細胞培養：人胃癌SNU-1細胞株用質量濃度為100 g/L的FBS血清RPMI 1640培養基置于37 ℃、體積分數為5%的CO2和95%濕度空氣的恒溫密閉式培養箱中貼壁培養。此細胞為單層貼壁細胞，每天觀察細胞生長情況，根據培養液顏色變化，2～3 d更換1次培養液，等待細胞生長處于對數生長期時，予質量濃度為2.5 g/L的胰蛋白酶消化傳代。

1.2.2 細胞株分組：采用體外培養的人胃癌SNU-1細胞系，將實驗分成4組：(1)對照組：未加入任何藥物。……