不同溫度糖氧剝奪對人神經母細胞瘤細胞表達小泛素樣修飾蛋白化相關蛋白的影響

呂若寧，童媛媛，劉晉萍

深低溫停循環（deep hypothermic circulatory arrest，DHCA）是復雜先天性心臟病矯治手術中的關鍵技術，雖然近年來選擇性腦灌注的應用一定程度增強腦保護效果，但DHCA的患者術后神經系統并發癥仍高達8%～26%［1-2］。DHCA期間的低溫可確保患者腦部代謝維持在較低水平，延長大腦缺血耐受時間。然而深低溫本身具有一定副作用并且會增加降溫復溫所需的體外循環時間，可能增加術后神經系統并發癥風險，臨床工作中對于停循環溫度的選擇存在較大爭議［3］。小泛素樣修飾蛋白（small ubiquitin-like modifier，SUMO）是一種通過對翻譯后蛋白進行修飾，從而發揮調節作用的小分子蛋白質［4-5］。研究發現，SUMO化是誘導大腦產生缺血缺氧耐受的關鍵環節，過表達SUMO1或SUMO2／3可增強細胞對缺血缺氧的耐受能力［6］。

目前為止，尚缺乏從體外循環角度對不同停循環溫度影響神經細胞SUMO化方面的研究。人神經母細胞瘤細胞（SHSY5Y）是一種分化程度較低的腫瘤細胞，其細胞形態、生理生化功能類似于正常神經細胞，在人類神經系統疾病方面的基礎研究應用廣泛。本實驗以糖氧剝奪（oxygen glucose deprivation，OGD）模擬停循環時缺血缺氧的狀態，觀察4 h不同程度低溫干預對缺血缺氧狀態下SHSY5Y細胞表達SUMO化相關蛋白的影響，并于再灌注24 h后觀察細胞凋亡情況，從SUMO化這一小分子水平探討不同停循環溫度對神經系統的保護作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 RPMI1640培養基、胰酶、優級胎牛血清（Gibco公司）；BCA蛋白定量試劑盒、超敏電化學發光（electrochemiluminescence，ECL）試劑盒（碧云天生物科技公司）；UBC9抗體、SUMO2+3抗體、SUMO1抗體、caspase-3抗體、β-actin抗體（abcam公司）；……