甲狀腺激素干預H-ras12V轉基因肝癌小鼠對肝腫瘤的影響研究

白云，鞏方明，田興松

有研究[1]發現，隨著人年齡不斷增長，發生腫瘤的幾率也增長。甲狀腺激素（THs）是具有調節機體發育、細胞增殖與分化、維持內環境穩定等多種作用的一類激素。老年人體內TH水平要明顯低于年輕人，TH水平與年齡的增長呈負相關[2]。腫瘤細胞抑制TH的生物學功能有多種分子機制，Ras癌基因可以通過上調Cyclin D1或經過磷酸化維甲酸受體（RXRα）抑制THs/TR信號通路。有學者[3]提出，TH對肝臟、肺和結直腸類腫瘤發生有抑制作用，但尚無定論，TH的作用機制亦不明確。本研究在H-ras12V轉基因肝癌小鼠探討了TH水平對小鼠腫瘤的影響。

1 材料與方法

1.1 動物、藥品和設備 3月齡SPF級雄性H-ras12V轉基因肝癌小鼠45只【遼寧實驗動物中心，生產許可證號為SCXK（遼）2013-0004，飼養于我院第一附屬醫院動物實驗中心】，體質量為24～32 g。宇宙甲狀腺素片由上海長城藥業有限公司生產（國藥準字H31022151），丙硫氧嘧啶片由上海信誼藥廠有限公司生產（國藥準字H19983194）。北京亞歐德鵬科技有限公司生產的DP-3401型游標卡尺，上海巴玖實業有限公司生產的SAF-680T型酶標儀，美國貝克曼庫爾特有限公司生產的Avanti JXN-30/26智能型高效離心機。

1.2 肝癌模型小鼠的制備 取小鼠45只，正常飼養1 w，隨機分為甲狀腺機能亢進癥組、甲狀腺機能減退癥組和對照組，每組15只，分別給予甲狀腺素片28.57 mg.kg-1·d-1、丙硫氧嘧啶片171.4 mg.kg-1·d-1和蒸餾水灌胃。待小鼠達到7 m后，稱量體質量。經眼球取血，靜置于離心管10～15 min，3000 r/m離心15 min，保留血清。取肝臟，稱質量。將肝組織剪切成約1 cm3大小組織塊，置于冷凍管中，-80℃保存[4]。

1.3 血清和組織TH檢測 采用ELISA法檢測血清T3和T4（北京百奧萊博科技有限公司）和游離組織T3和T4（上海鈺博生物科技有限公司）[5]。

1.4 小鼠腫瘤生長情況檢測 將小鼠肝臟摘取后，使用游標卡尺測量肉眼所見的腫瘤直徑，記錄不同直徑的腫瘤個數。

1.5 統計學方法 應用SPSS 20.0軟件進行分析，對符合正態分布的計量資料以（±s）表示，采用獨立樣本的t檢驗。以P＜0.05為存在統計學差異。

2 結果

2.1 各組小鼠TH水平比較 甲狀腺機能亢進癥（A）組小鼠血清T3和T4水平顯著高于甲狀腺機能減退癥組（P＜0.05）；甲狀腺機能亢進癥（B）組小鼠游離T3和T4水平顯著高于其他兩組小鼠，甲狀腺機能減退癥組小鼠游離組織T3水平顯著低于對照組（P＜0.05，表1）。

表1 各組小鼠血清和游離TH水平（±s）比較

表1 各組小鼠血清和游離TH水平（±s）比較

與對照組比，①P＜0.05；與甲狀腺機能亢進癥組比，②P＜0.05

?

2.2 各組小鼠肝腫瘤生長情況比較 見表2。

表2 各組小鼠肝腫瘤生長情況（±s）比較

表2 各組小鼠肝腫瘤生長情況（±s）比較

與對照組比，①P＜0.05；與甲狀腺機能亢進癥組比，②P＜0.05

?

3 討論

有學者發現，在經Ras癌基因誘導的肝腫瘤動物，其肝癌病灶細胞RXRα的磷酸化水平顯著增高[6，7]，THS/TR通路信號傳導被抑制[8-10]。臨床上發現，肝癌患者常會有正常甲狀腺機能的高甲狀腺素血癥發生[11-13]。動物實驗[14-17]發現，轉基因肝癌小鼠血清THs顯著升高。因此，推測體內TH水平與腫瘤細胞的繁殖、分化存在關聯[18，19]。

本研究發現甲狀腺機能亢進癥組小鼠血清和游離組織TH水平明顯高于對照組或甲狀腺機能減退癥組，而肝組織腫瘤個數和肝/體質量比亦高于其他兩組，說明甲狀腺機能亢進癥組小鼠甲狀腺功能增強，對腫瘤生長起了抑制作用。張敏[20]等也曾在Ras基因誘導的肝腫瘤小鼠研究發現，甲狀腺素可有效抑制肝臟腫瘤的生長。

[1]羅翠松，汪珍光，林云，等.年齡對肝癌合并糖尿病患者預后的影響：基于傾向值匹配的分析.第二軍醫大學學報，2016，37（9）：1171-1175.

[2]張秀云.高齡人群血清促甲狀腺激素、血脂水平與年齡的相關性分析. 臨床心血管病雜志，2016，32（4）：421-423.

[3]Memon NS，Kazi TG，Afridi HI，et al.Correlation of manganese with thyroid function in females having hypo-and hyperthyroid disorders.Biol Trace Elem Res，2015，167（2）:165-171.

[4]Ajavon A，Killian D，Odom R，et al.Influence of thyroid hormone disruption on the incidence of shingles.Epidemiol Infect，2015，143（16）:3557-3571.

[5]楊榕，范晨玲，畢美，等.自身免疫性甲狀腺炎小鼠發病中調節性 T細胞、Th17 細胞的變化. 實用藥物與臨床，2014，17（12）：1511-1515.

[6]趙宏，劉海彤，魏冰，等.甲狀腺功能亢進合并肝損害30例臨床特點及其治療效果. 中國傷殘醫學，2015，23（9）：117-118.

[7]冼中任，方偉禎，黃堅，等.Graves甲狀腺功能亢進性心臟病患者肝功能異常的臨床分析. 廣東醫學，2015，36（21）：3342-3344.

[8]潘倩，章建全.甲狀腺腺瘤與肝海綿狀血管瘤同期聯合微波消融治療的初步嘗試.第二軍醫大學學報，2015，36（5）：573-576.

[9]刁海鑫，吳文溪，鄧勇.甲狀腺全切術治療原發性甲狀腺功能亢進療效及對患者心臟功能和肝功能的影響.中國現代醫學雜志，2014，24（34）：94-97.

[10]應愛華.丙硫氧嘧啶與甲巰咪唑對甲狀腺功能亢進癥肝功能影響情況的對比研究. 中國醫藥導報，2014，11（4）：71-73.

[11]趙榮蘭，宋偉，孫艷麗，等.甲狀腺激素受體β對大鼠肝癌細胞RH-35凋亡和增殖的影響.中華內分泌代謝雜志，2016，32（8）：691-695.

[12]陳強，謝慶吉，岑宏，等.P21激活激酶1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義的研究.中華普通外科學文獻（電子版），2015，9（5）：21-24.

[13]謝蓮，曾錦章，楊汀，等.TPA誘導肝癌細胞SMMC7721凋亡及與RXRα和TR3的關系.云南大學學報：自然科學版，2006，28（3）：271-276.

[14]劉輝，楊波，吳亮亮，等.Th/Tr淋巴細胞比值評估乳腺癌患者抗腫瘤免疫狀態. 現代腫瘤醫學，2010，18（4）：689-691.

[15]熊瑋，駱瑜，董少紅，等.微小RNA-146a上調cyclin D1表達誘導大鼠血管平滑肌細胞的增殖.中國免疫學雜志，2016，32（7）：974-978.

[16]程靜屏，傅念，羅艷云，等.甲狀腺素對非酒精性脂肪肝大鼠ANGPTL3 表達的影響. 中南醫學科學雜志，2016，44（1）：25-28.

[17]盧文麗，方肇勤，潘志強，等.甲狀腺激素釋放相關水解酶基因在H22肝癌小鼠早期不同證候中的表達特征.國際中醫中藥雜志，2014，36（7）：623-627.

[18]段宏.抗甲狀腺功能亢進癥藥物致肝功能損害的臨床分析.臨床合理用藥雜志，2014，7（22）：63-64.

[19]何珂，胡蘊.促甲狀腺激素受體抗體對人肝癌細胞HepG2凋亡和增殖的影響. 臨床薈萃，2014，29（1）：45-48.

[20]張敏，聶鑫，董建一，等.甲狀腺激素對Ras癌基因誘導的肝腫瘤抑制作用研究. 中華腫瘤防治雜志，2015，22（20）：1596-1601.