廣東韶關地區163例男性不育患者Y染色體微缺失分析

黃文波 馬占忠 范舒舒 徐靜 羅慧旗 劉滿霞 陳玉美

（1.韶關學院醫學院醫學技術系，廣東 韶關 512026；2.汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院 檢驗科、產前診斷中心，廣東 韶關 512026）

全世界約有15%的夫婦不育，50%與男性因素有關［1］。Y 染色體無精因子（azoospermia factor，AZF）微缺失是男性不育的重要遺傳因素［2］。本研究采用熒光定量PCR技術對無精子或嚴重少精子患者的Y染色體AZF基因的6個序列標簽位點進行檢測，從分子水平探討男性不育的病因，為臨床輔助生殖提供依據和指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2018年10月在粵北人民醫院就診的163例無精或嚴重少精子的患者，年齡24～45歲（平均年齡31.6歲），無精癥或嚴重少精癥診斷參照 WHO診斷標準［3］。選取50例精液常規分析正常的健康男性為對照組，兩組年齡差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑Y染色體微缺失檢測試劑（PCR熒光探針法）由上海透景生命科技股份有限公司生產，檢測包括AZFa區的s Y84、s Y86，AZFb區的s Y127、sY134，AZFc區的sY254、sY255A以及SRY、ZFX／ZFY位點。核酸提取純化試劑由江蘇康為世紀生物科技有限公司生產。儀器：伯樂CFX96熒光定量PCR儀，IMPLEN Nano photometer N50 Touch微量分光光度儀等。

1.2.2 提取DNA，PCR擴增采集靜脈血2 ml，EDTA抗凝；取200μl血液樣本，用Blood Gen Mini Kit核酸提取試劑盒提取全血基因組DNA；用微量分光光度儀檢測DNA OD260／OD280，要求在1.8～2.0之間。PCR反應體系：A組和B組分別加PCR預混液22.5μl，樣本DNA模板2.5μl，設陰性對照和質控品。PCR反應條件：50℃2 min；95℃5 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，38 cycles；72 ℃ 5 min；60 ℃ 時收集 FAM／VIC／ROX／Cy5熒光信號。具體步驟按照試劑盒說明書和相應SOP文件操作。

1.2.3 結果判讀質控品結果為典型的S型擴增曲線且Ct＜32，陰性對照4個通道檢測均無擴增曲線。其他樣本位點結果為典型的S型擴增曲線且Ct＜32判為存在，否則判為缺失?！?br>