重組抗原CP4-EPSPS的克隆、表達和純化

鄧漢超 ，劉玉琛 ，鄧國標 ，劉 晉 ，周向陽

(1.深圳市農(nóng)業(yè)科技促進中心，廣東 深圳 518040；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)作物種子質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(深圳)， 廣東 深圳 518040；3.深圳市作物分子設計育種研究院, 廣東 深圳 518107)

世界上第一例轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆問世以來，轉(zhuǎn)基因作物的應用與推廣已有16載，我國每年從國外進口大量的轉(zhuǎn)抗草甘膦CP4-EPSPS的作物和食品。隨著人們對食品及轉(zhuǎn)基因食品安全的關注，建立轉(zhuǎn)基因作物、苗、種子及其產(chǎn)品的檢測技術體系極為重要。我國目前市場上已經(jīng)開發(fā)出多種商業(yè)化的基于蛋白質(zhì)測定的轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒，然而由于生產(chǎn)工藝的不同，表達出的外源蛋白通過參考物質(zhì)定量的量值難以溯源到上一級的計量標準，因此造成不同廠商不同試紙條測定結果不準確和缺乏可比性，為此將對轉(zhuǎn)基因的安全監(jiān)管帶來隱患，而且會引發(fā)法律、貿(mào)易糾紛等經(jīng)濟和社會問題。面對我國缺少基于統(tǒng)一標準的溯源蛋白，為此建立高效、快速、大量制備純度高的重組蛋白CP4-EPSPS技術體系尤為重要。本研究通過構建細菌表達載體在大腸桿菌進行表達，建立大量制備高純度的重組蛋白CP4-EPSPS技術體系，可為轉(zhuǎn)基因植物、食品等蛋白檢測用抗體提供穩(wěn)定免疫性抗原，同時也可為蛋白標準物質(zhì)研制提供穩(wěn)定物質(zhì)基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究材料

轉(zhuǎn)基因大豆種子，表達載體pet30a，E.coliBL21(DE3)感受態(tài)細胞為實驗室保存。

1.1.2 試劑

T4 DNA連接酶、NdeI限制性內(nèi)切酶、XhoI酶、Taq DNA聚合酶等酶購自TaKaRa公司、卡那霉素Kan購自深圳市百勝科創(chuàng)生物技術有限公司。……