冬凌草甲素對人臍靜脈內皮細胞的抑制作用

田麗莉，朱國福，盛東來

（1.浙江醫院 中藥房，浙江 杭州 310013；2.上海中醫藥大學 中藥學院，上海 201203；3.杭州師范大學 發育與再生研究所，浙江 杭州 310036）

冬凌草[Rabdosia rubescens（Hemsl.）Hara]，唇形科香茶菜屬植物，主要分布于中國黃河流域和黃河流域以南的區域，具有清熱解毒、健胃活血、消炎止痛及抗腫瘤等功效。冬凌草甲素為冬凌草抗腫瘤的主要活性成分[1]。本課題組前期研究證明，冬凌草甲素可明顯抑制斑馬魚血管生成[2]。但冬凌草甲素在血管內皮細胞方面的研究較少，本研究選擇人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC），研究冬凌草甲素對HUVEC增殖、凋亡、遷移、侵襲和成管的影響，為血管內皮細胞相關的研究提供依據。

1 材料和方法

1.1 主要材料 冬凌草甲素（Oridonin，上海源葉生物科技有限公司），經高效液相色譜鑒定，純度≥98%；HUVEC（中國科學院上海生命科學院細胞庫）；RPMI1640培養液（美國Invitrogen公司），MTT試劑盒（美國Sigma公司），Annexin V-FITC試劑盒（美國BD Pharmingen公司），Matrigel試劑盒（美國BD Pharmingen公司），Calcein-AM試劑盒（美國Sigma公司），結晶紫染色液（上海碧云天生物科技有限公司），二甲基亞砜（上海展云化工有限公司）；Trizol試劑（美國Invitrogen公司）；RT試劑盒（大連Takara公司），DRR041A SYBR試劑盒（大連Takara公司），引物由大連TaKaRa公司設計合成，引物序列見表1。

表1 引物序列

1.2 方法

1.2.1 MTT法檢測細胞活力：培養HUVEC，培養的具體條件為：RPMI1640（含10%胎牛血清、100 U青霉素和100 U鏈霉素），于37 ℃、5% CO2培養箱中，培養細胞至對數生長期；細胞消化計數，調整細胞密度為6×104個/mL，96孔板中每孔加入90 μL細胞懸液；次日，每孔加入10 μL低、中、高濃度的冬凌草甲素（濃度分別為156、312、625 mg/L），并于37 ℃、5% CO2培養箱中繼續培養；此后在24 h時檢測，每孔加入5 g/L的MTT 10 μL，于37 ℃、5%CO2培養箱培養；……