N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶6對乳腺癌細胞MCF-7增殖和遷移的影響

周文媛，任軍，紀元，陳曉明

（溫州醫(yī)科大學 檢驗醫(yī)學院 生命科學學院，浙江 溫州 325035）

乳腺癌是全球女性最常見的癌癥。綜合乳腺癌診斷和治療的現(xiàn)狀，乳腺癌早期診斷標志物以及藥物靶點的發(fā)現(xiàn)意義重大[1-2]。GALNT6是N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶（N-acetyl galactosyltransferase，GALNT）家族的重要成員[3]，有報道稱它與乳腺癌、胃癌等的發(fā)生發(fā)展存在一定的相關性[4-6]。它在乳腺癌中呈高表達狀態(tài)，但其作用機制有待進一步探討。本研究通過構建GALNT6低表達的MCF-7細胞株，檢測GALNT6對乳腺癌細胞MCF-7增殖、遷移等生物學功能的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 細胞與載體：乳腺癌細胞MCF-7購自上海中國科學院細胞庫。GALNT6的RNA干擾載體pGPU6/GFP/Neo-GALNT6和對照載體pGPU6/GFP/Neo-shNC均由上海吉瑪技術有限公司設計合成。

1.1.2 試劑：胎牛血清FBS為美國Hyclone公司產(chǎn)品，RPMI 1640培養(yǎng)基為美國Gibco公司產(chǎn)品，胰酶細胞消化液、青霉素-鏈霉素溶液（100×）、辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG、辣根過氧化物酶標記羊抗鼠IgG和β-Actin小鼠單克隆抗體均購于上海碧云天生物技術研究所，CCK8試劑購于日本同仁株式會社，細胞周期檢測試劑盒購于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，GALNT6兔多克隆抗體購于美國Abcam公司，PCNA兔單克隆抗體購于美國Cell Signaling Technology公司，Prime Script RT Reagent Kit購于大連寶生物公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)：將細胞置于含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液中，用25 mL透氣細胞培養(yǎng)瓶放在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37 ℃、5% CO2、95%濕度）。實驗共分3組：Mock組：未轉(zhuǎn)染組，NC組：空載體對照組，sh-GALNT6組：GALNT6低表達組。

1.2.2 Real-time PCR：采用Trizol法提取細胞總RNA，ND2000測定RNA濃度，同時觀察樣品OD260/OD280比值，比值在2.0左右時表示所提取的RNA純度較高，可用于下一步實驗。……