Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中的表達及意義

楊新霞

[摘要] 目的 分析Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中的表達及意義。 方法 隨機抽取該院自2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關性肝硬化患者及抽取同時段內來該院實施健康體檢的受檢者55名作為研究對象；將前者作為觀察1組、觀察2組，后者作為對照組，針對所有研究對象，均實施相對應的檢查，分析血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率。結果 血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率觀察1組（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%、觀察2組（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%明顯高于對照組（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%，差異有統計學意義（P<0.05），且血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率呈正相關性；觀察2組患者中肝臟中的α-平滑肌肌動蛋白水平、IL-17mRNA表達水平明顯高于對照組，故α-平滑肌肌動蛋白水平與纖維分化期、肝臟炎癥水平呈正相關性，（r=0.430、0.660、0.601、0.506，P<0.05）。 結論 Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中發生與發展中發揮著作用。

[關鍵詞] Th17細胞；乙型肝炎病毒；相關性肝病

[中圖分類號] R512 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2018）11（a）-0030-03

[Abstract] Objective To analyze the expression and significance of Th17 cells in hepatitis B virus-associated liver disease. Methods A total of 55 patients with chronic hepatitis B and 55 patients with related cirrhosis who were admitted to the hospital from November 2012 to December 2014 were enrolled. The subjects were treated as the observation group 1 and the observation group 2， and the latter as the control group. The corresponding examinations were performed for all the subjects， and the plasma IL-17 level and the peripheral blood Th17 cell frequency were analyzed. Results Plasma IL-17 levels and peripheral blood Th17 cell frequency were observed in 1 group （21.73±4.66） pg/mL， （2.16±0.40）%， and observation group 2 （32.52±9.58） pg/mL， （2.19±0.33）%， significantly higher than the control group （11.75±3.3） pg/mL， （1.10±0.25）%，the different was statistically significant（P<0.05）， and plasma IL-17 level， peripheral blood Th17 cell frequency was positively correlated； observation group 2 of patients in the liver α - the levels of smooth muscle actin and IL-17 mRNA were significantly higher than those in the control group， so α-smooth muscle actin level was positively correlated with fibrosis stage and liver inflammation level（r=0.430， 0.660， 0.601， 0.506，P<0.05）. Conclusion Th17 cells play a role in the occurrence and development of hepatitis B virus-associated liver disease.

[Key words] Th17 cells； Hepatitis B virus； Related liver diseases

臨床研究表明，細胞介導免疫反應在乙型肝炎病毒感染中發揮著重要作用，特別是病毒特異性的T淋巴細胞反應中，其是控制乙型肝炎病毒感染的關鍵。而Th17細胞作為T淋巴細胞中的新成員，其以維甲酸相關的孤兒受體γt為特異性轉錄調節因子而存在，以分泌IL-17、IL-21、IL-22等而命名[1]。該次研究隨機選取該院2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關性肝硬化患者及55名健康體檢者為研究對象，分析Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中的表達及意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機取該院收治的55例慢性乙型肝炎、55例相關性肝硬化患者及抽取同時段內來該院實施健康體檢的受檢者55名作為研究對象；將前者作為觀察1組、觀察2組，后者作為對照組。觀察1組男39例、女16例，年齡19～72歲，平均（45.5±10.7）歲。觀察2組男36例、女19例，年齡20～71歲，平均（45.0±11.2）歲。對照組男37名，女18名，年齡20～72歲，平均（46.0±10.5）歲。對比分析3組研究對象基線資料，差異無統計學意義（P>0.05）。經該院倫理委員會批準，患者或家屬知情同意。

1.2 方法

流式細胞術檢測方法：抽取患者清晨空腹靜脈血3 mL，將其置入肝素抗凝真空采血管中，取300 μL全血，加入50 ng/mL十四烷酸PMA、0.7 μg/mL莫能霉素（型號BJ-0015-2016）、1 μg/mL離子霉素（美國生產、I-6800-5 mga），進行培養箱孵育5 h，24 h內檢測外周血Th17細胞頻率。

酶聯免疫吸咐法檢測方法：血液離心處離后，取離心血漿，將其保存于零下80℃的冰箱內，通過ELISA檢測IL-17水平。

熒光定量法檢測IL-17mRNA表達情況：取健康研究對象及乙型肝炎病毒患者的肝組織，將其放置于液痰中轉移，并保存于-80℃的冰箱內備用，應用逆轉錄試劑合成cD-NA，待其迅速冰浴后。實施熒光定量PCR，擴增IL-17mRNA[2-3]。

取新鮮肝組織后，將其固定于甲醛溶液中，24 h內將其制作成蠟塊，對蠟塊連續切片后，進行常規HE染色，在光學顯微鏡下觀察，α-平滑肌肌動蛋白表達情況采用免疫組織化學染色法檢測。

1.3 分析指標

分析3組研究對象血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率、α-平滑肌肌動蛋白水平、IL-17mRNA表達水平，并對Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中的表達及意義進行分析。

1.4 統計方法

采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計量資料采用（x±s）表示，行t檢驗，計量資料采用n（%）表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率、IL-17mRNA表達水平

觀察1組、觀察2組血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 血清學指標、外周血Th17細胞頻率相關性分析

分析觀察1組、觀察2組患者的血漿IL-17與外周血Th17細胞頻率發現，以上兩個指標呈正相關性，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

乙型肝炎病毒感染在臨床疾病治療上較為常見，隨著病情發展，會引起乙型肝炎病毒相關性肝病，如慢性乙型肝炎、相關性肝硬化[4]。臨床研究表明[5]，乙型肝炎病毒引起的肝臟損傷與轉歸情況，與患者機體細胞免疫功能下降、免疫耐受有著密切關系。而淋巴細胞是免疫應答的重要組成部分，其在免疫調節中占據重要作用。目前Th17是臨床新發現的一個細胞亞群，其特征為大量分泌IL-17，故Th17在肝臟疾病的發生與發展過程中發揮著重要作用。

Th17細胞會分泌IL-17、IL-21、細胞腫瘤因子等，以上因子會聚集在炎癥部位，增加炎癥反應，從而加重患者病情。同時IL-17還會引發其它炎細胞因子的出現，增加對組織的損傷程度。在肝臟組織中，通過對Th17、IL-17、IL-17mRNA表達水平的檢測發現，在乙型肝炎病毒相關性肝病患者中，以上指標的表達水平，明顯要高于健康人群，且Th17與血清學指標呈正相關性[6]。此外，肝纖維化是一種修復過程，臨床特征為ECM的過度沉淀與異常增生，當肝纖維處于晚期階段時，HCS會發揮中心作用，而α-平滑肌肌動蛋白水平又是HCS的標志物，故當肝硬化患者α-平滑肌肌動蛋白水平升高時，患者體內有肝臟炎癥與纖維化程度均較高，說明患者肝臟炎癥較高且肝臟損傷較嚴重。由此推斷，Th17細胞會參與HCS的激活過程[7]。該次研究顯示：血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率觀察1組[（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%]、觀察2組[（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%]明顯高于對照組[（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%]（P<0.05）。是由此，Th17是最重要的效應因子，其在患者體內表達廣泛，不僅是重要的促炎因子，還可誘導其它炎細胞因子等進行表達，從而加重炎癥細胞的浸潤及對組織損傷。該次研究血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率。其與陳梅等人[8]研究結果相似，即相關性肝硬化患者血漿IL-17水平、外周血Th17細胞頻率分別為（32.51±9.57）pg/mL、（2.18±0.34）%[8]。

綜上所述，在乙型肝炎病毒相關性肝病的發生與發展過程中，Th17細胞起著重要作用，值得推廣。

[參考文獻]

[1] 姚思敏，劉映霞，李曉鶴，等.慢性乙型肝炎患者外周血Th17細胞及相關轉錄因子表達的檢測[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，2015，29（1）：2-4.

[2] 李成偉，盧丹，那妍，等.恩替卡韋治療后e抗原陽性慢性乙型肝炎患者Treg/Th17比率的變化及其與療效的關系[J].中國醫科大學學報，2017，46（1）：33-35，40.

[3] 栗軍香，王銀茹，李阿靜，等.Treg/TH17細胞因子的平衡作用與不同中醫癥候HBV宮內感染相關性研究[J].海南醫學，2016，27（21）：3448-3451.

[4] 劉嬌， 王川林，古雪，等.Th17/Treg細胞失衡與乙肝病毒感染相關性肝病的關系[J].川北醫學院學報，2017，32（3）：479-482.

[5] 陳端.拉米夫定在慢性乙型肝炎患兒外周血Th17細胞變化的研究[J].檢驗醫學與臨床，2016，13（9）：1220-1221.

[6] 袁睿，韋嘉.IL-17/Th17細胞在感染性疾病中的作用研究進展[J].醫學綜述，2013，19（13）：2322-2324.

[7] 申紅玉，杭雙熊，錢梅云，等.抗病毒治療對慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞及其相關細胞因子的影響[J].實用醫學雜志，2016，32（9）：1425-1427.

[8] 陳梅，郭曉云，姜海行，等.Th17細胞在乙型肝炎病毒相關性肝病中的表達及意義[J].重慶醫學，2016，45（5）：592-594，59

（收稿日期：2018-08-02）