中藥注射液干預對SD大鼠全麻心肌損傷的影響分析

黃進榮　朱成才　劉彩顏

【摘要】 目的：分析中藥注射液干預對SD大鼠全麻心肌損傷的影響。方法：選擇健康的SD大鼠60只，分為丹紅組、參附組、參照組3組，每組各20只。丹紅組大鼠尾靜脈注射丹紅注射液，參附組注射參附注射液，參照組大鼠注射0.9%的氯化鈉溶液。測定心肌梗死面積、血清以及心肌組織的生化指標、分析心肌超微結構病理。結果：丹紅組和參附組的心肌梗死范圍明顯小于參照組，參附組的MDA、SDN值低于丹紅組和參照組，參附組和丹紅組心臟超微結構辯護相比參照組病態明顯減輕（P<0.05）。結論：參附注射液能夠減輕自由基對心肌細胞的損傷，起到保護心肌的作用。

【關鍵詞】 參附注射液； 心肌損傷； MDA； SDN

Analysis the Effect of Traditional Chinese Medicine Injection Intervention on the Myocardial Injury of SD Rats/HUANG Jin-rong，ZHU Cheng-cai，LIU Cai-yan.//Medical Innovation of China，2017，14（22）：143-146

【Abstract】 Objective：To analyze the effect of traditional Chinese medicine injection intervention on the myocardial injury of SD rats.Method：60 rats of healthy SD were selected，they were divided into three groups：Danhong group，Shenfu group and reference group，20 rats in each group.Danhong group was given Danhong injection，Shenfu group was given Shenfu injection，reference group was injected 0.9% of saline.The area of myocardial infarction，serum and the biochemical index of myocardial tissue，and analysis of myocardial microstructural pathology were measured.Result：The myocardial infarction of the Danhong and Shenfu group were significantly less than the reference group；the MDA and SDN values of the Shenfu group were lower than the Danhong group and the reference group；the reference group was significantly reduced compared with the hyper-microstructure of the Danhong group （P<0.05）.Conclusion：The injection can reduce the damage of free radicals to heart muscle cells and protect the heart muscle.

【Key words】 Shenfu Injection； Myocardial injury； MDA； SDN

First-authors address：Maternal and Child Health Care Hospital of Zengcheng District Guangzhou，Guangzhou 511300，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.22.043

心肌缺血損傷經常發生于急性心肌梗死后的冠脈內溶栓術、冠脈內球囊擴張血管成形術以及體外循環心內直視手術等過程中[1-5]。其機理復雜，當前醫學研究認為與細胞內Ca2+超載、氧自由基大量生成、微血管內皮組織損傷及血管內皮細胞與血小板之間相互作用有關[6]。本文通過比較參附、當紅注射液對大鼠全麻心肌損傷的影響，對注射液影響結果進行分析，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 大鼠 選擇健康的SD大鼠60只，重量220～260 g，雌性30只，雄性30只。

1.1.2 試劑 丹紅注射液，10 mL/支，紅棕色澄明液體，參附注射液，丙二醛（MDA），超氧化物歧化酶（SOD），血清磷酸肌酸激酶（CPK）。

1.1.3 儀器 HX200型動物呼吸機；ECG651型心電圖機；BL420E+生物信號記錄分析系統；SN-3001酶標儀。

1.2 方法 將60只大鼠分為丹紅組、參附組、參照組三組，每組大鼠20只。心肌損傷大鼠模型制作：在大鼠腹腔注射20%烏拉坦 5 mL/kg的麻醉后，將大鼠以仰臥位固定在鼠臺上，使用針狀電極插入右前肢和左后肢皮下，連續監測導聯心電圖。頸部正中氣管切開術（第3、4氣管軟骨環間）作氣管插管，連接動物呼吸機進行人工通氣（潮氣量8～10 mL，呼吸頻率60～70次/min）。分離右頸總動脈插入硅膠管，導管另一端通過壓力傳感器連接于MPA心功能分析系統，然后緩慢插入導管至左心室，測定左心室收縮壓、左心室舒張末壓、左室內壓最大上升速率、左室內壓最大下降速率，分離頸外靜脈并插入導管以備給藥。沿胸骨左緣旁0.5 cm切開皮膚，剪斷第3、4、5根肋骨，進入胸腔，打開心包暴露心臟，在左心耳根部下緣2 mm處進針，用5-0無損傷縫合針穿過左冠狀動脈前降支下方的心機表層，從肺動脈圓錐左緣出針穿線，待心電圖恢復穩定10 min后記錄正常參數，在LAD表面穿線處置一雙折的10號絲線活結結扎LAD，以造成左心室前壁缺血40 min，然后松開活結，恢復左冠狀動脈血液灌注30 min和120 min。LAD結扎成功標準：心電圖現實ST段抬高、QRS波變高變寬和缺血心肌變為青紫色。LAD再通成功標準：解開結扎線后QRS波振幅逐漸回落，抬高的T段回落和缺血區心肌變紅。endprint

1.3 實驗操作 對丹紅組大鼠尾靜脈注射丹紅注射液10 mL/kg，2次/d，連續5 d；對參附組大鼠注射參附注射液5 mL/kg，2次/d，連續5 d；對參照組大鼠注射0.9%的氯化鈉注射液5 mL/kg。從實驗后第4天起，丹紅組和參附組均對大鼠腹腔注射異丙腎上腺素注射液1 mg/kg，1次/d，連續2 d。各組大鼠在末次注射異丙腎上腺素注射液5 min后，腹腔注射烏拉坦5 mL/kg麻醉，連接BL-420生物記錄儀記錄各組大鼠心電圖，2 h后取血以及心臟待測。

1.4 觀察指標

1.4.1 心肌梗死面積測定 待結扎冠脈24 h后取心臟，-20 ℃下冰凍10 min，在結扎線下平行于冠狀溝將左心室橫切5片，1%TTC溶液37 ℃染色6 min，染色后吸干水分，測量梗死面積占心室面積的百分比。

1.4.2 血清以及心肌組織的生化指標測定 待結扎冠脈24 h后，腹主動脈取血，進行血清分離，取心肌組織，用0.025 mol/L蔗糖溶液制成勻漿，離心12000 r/min，30 min，取上清液，按照試劑盒要求檢測MDA、SOD值。

1.4.3 心肌超微結構病理觀察 取出心臟后迅速切取正常心肌和損傷心肌2 mm3大小各一塊，置4 ℃ 3%戊二醛中按電鏡常規制樣，使用JEM-1200型投射電鏡觀察心肌超微結構改變。

1.5 統計學處理 使用SPSS 22.0統計軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠心肌梗死面積測定 丹紅組和參附組皆能有效縮小心肌梗死范圍，與參照組比較差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 各組心肌組織MDA和SOD含量比較 參附組MDA、SDN值低于丹紅組和參照組，丹紅組MDA、SDN值低于參照組（P<0.05）。見表2。

2.3 各組心肌超微結構觀察 參照組心肌超微觀察：細胞膜皺縮，部分破裂；細胞核不規則，染色質邊集，異染色質增多，線粒體嵴模糊，部分出現消失情況，線粒體間有大量的空泡；肌原纖維排列紊亂，呈斑塊狀、均質化，肌節模糊，敏感帶模糊。參附組：與參照組相比，病態明顯減輕，肌原排列比較整齊，線粒體嵴較光滑。丹紅組心臟超微結構變化基本同參附組。

3 討論

心肌損傷時，自由基的產生及其介導的脂質過氧化反應，心肌細胞Ca2+超載是心肌損傷的重要環節之一。因此，尋找有效氧自由基清除劑以及Ca2+拮抗劑，恢復損傷缺血區心肌細胞正常功能，已經成為心肌缺血損傷研究的重要方面[7-11]。

氧自由基形成過多是心肌缺血發生的主要機制之一[12-14]，丙二醛（MDA）含量變化可直接反映出細胞受自由基損傷的程度[15]，超氧化物歧化酶（SOD）能夠清除超氧陰離子，保護機體免受氧自由基損傷，其活性高低可間接反應機體清除氧自由基的能力[2]。本次對照實驗中，參附注射液和丹紅注射液均表現出了良好的保護效果，其主要原理為：注射液注射后，一方面能夠擴大冠狀動脈，另一方面能夠疏通血管，增加血流量；緩解心肌細胞代謝異常，改善心肌線粒體功能，促進心肌細胞ATP生成；抑制Ca2+回流，降低Ca2+濃度，預防Ca2+超載，進而緩解心肌細胞受到的損傷[1-3]。

本文實驗中，丹紅組和參附組的心肌梗死范圍明顯小于參照組，說明兩種注射液皆能有效縮小心肌梗死范圍；參附組的MDA、SDN值低于丹紅組和參照組，丹紅組的MDA、SDN值低于參照組（P<0.05）。參附注射液的使用相較于丹紅注射液、生理鹽水注射液能明顯的抑制心肌缺血損傷大鼠血、心肌組織MDA含量的升高，提高SOD活性。參附注射液能夠通過提高內源性抗氧化酶SOD活性[16-20]，清除自由基引起的脂質過氧化反應，減輕自由基對心肌細胞的損傷[4]，起到保護心肌的作用。

參考文獻

[1]燕憲亮.RIP3硝化在大鼠心腦缺血再灌注損傷中的作用及紅花黃色素的干預研究[D].濟南：山東大學，2015.

[2]謝春.SD大鼠腦缺血再灌注后Smad3和Smad7表達的變化及丹紅注射液干預的影響[D].長沙：中南大學，2012.

[3]郝然.參麥注射液對心肌急性缺血缺氧損傷干預作用的研究[D].北京：北京中醫藥大學，2009.

[4]迪麗努爾·買買提依明.CMS大鼠及后代模型的建立和N-乙酰半胱氨酸及維藥香青蘭藥物干預的研究[D].烏魯木齊：新疆醫科大學，2014.

[5]王創暢.清熱、活血中藥調控TLR4信號干預AS大鼠模型及AMI熱毒證候病因的研究[D].廣州：廣州中醫大學，2016.

[6]馮湘雯.刺丹注射液的制備及其對大鼠離體心臟泵血功能的影響[D].哈爾濱：黑龍江中醫藥大學，2015.

[7]李淑梅.炎癥反應在冠狀動脈微栓塞后心肌損害中的作用及NF-κB抑制劑干預的實驗研究[D].福州：福建醫科大學，2007.

[8]陳墾.G蛋白偶聯受體激酶4在骨骼肌多巴胺D1受體降低胰島素抵抗及血管平滑肌AT1受體導致血管反應性增高中的作用及機制[D].重慶：第三軍醫大學，2014.

[9]崔忠林.缺血預適應對大鼠肝移植缺血再灌注損傷的保護性作用研究[D].廣州：南方醫科大學，2014.

[10]陳彥靜.參麥注射液改善急性心肌梗死大鼠心功能、左室重構作用及其機制的研究[D].北京：北京中醫藥大學，2005.

[11]李淑梅.炎癥反應在冠狀動脈微栓塞后心肌損害中的作用及NF-κB抑制劑干預的實驗研究[D].福州：福建醫科大學，2007.

[12]王東慧.運動干預對高脂飼養衰老大鼠心肌和腓腸肌抗氧化能力的影響[D].石家莊：河北師范大學，2016.

[13]張迪迪.抗阻力運動與MSTN抗體及聯合干預對大鼠心肌胰島素抵抗的改善作用及分子機制研究[D].西安：陜西師范大學，2015.

[14]李宏菊.大鼠心臟停搏供肝活性研究及丹參對DCD供肝熱缺血保護作用的實驗研究[D].昆明：昆明醫科大學，2014.

[15]王圣軒.川芎嗪對大鼠急性脊髓損傷模型中FADD表達及Caspase-8活性的影響[D].長沙：中南大學，2009.

[16]張治水.心肌缺血后處理對大鼠心肌細胞凋亡及Bcl-2、Bax的影響[D].石家莊：河北醫科大學，2008.

[17]岳維.結扎冠狀動脈對大鼠心肌組織NK1受體、β1腎上腺素能受體表達的影響及P物質、降鈣素基因相關肽mRNA定位的研究[D].太原：山西醫科大學，2008.

[18]溫建忠.急性心肌缺血時大鼠丘腦束旁核μ1-阿片受體mRNA和5-HT1A受體mRNA的表達及嗎啡、曲馬多干預效應的實驗研究[D].山西醫科大學，2004.

[19]陳淑芬，姚震，王岱岱.CT-1C-末端多肽不同干預對大鼠MI/R后血漿纖維蛋白原濃度變化的影響[D].第10屆中國南方國際心血管病學術會議專刊，2008：134-135.

[20]李銀平，鄭貴軍，武子霞，等.血必凈注射液對膿毒癥大鼠活化蛋白C及凝血功能的影響[D].中國中西醫結合急救雜志，2008，15（6）：361-364.

（收稿日期：2017-06-26） （本文編輯：周亞杰）endprint