骨髓間充質干細胞在低氧共培養條件下對髓核細胞保護作用的實驗研究

季偉李海峰程實陳佳海徐成劉玥何勍阮狄克*

（1.第四軍醫大學西京醫院骨科，西安710032；2.海軍總醫院骨科，北京100048）

?基礎研究?

骨髓間充質干細胞在低氧共培養條件下對髓核細胞保護作用的實驗研究

季偉1,2李海峰2程實2陳佳海2徐成2劉玥2何勍2阮狄克2*

（1.第四軍醫大學西京醫院骨科，西安710032；2.海軍總醫院骨科，北京100048）

背景：對于骨髓間充質干細胞（BMSCs）與髓核（NP）細胞共培養的研究主要集中在不同條件下的干細胞向NP細胞表型的分化。一些研究表明，在動物試驗中干細胞影響退變的NP細胞。少有研究人BMSCs對NP細胞的影響，特別是在低氧條件下。目的：建立同一患者的BMSCs和NP細胞的共培養模型，探討在低氧環境下BMSCs對NP細胞的生物學影響。方法：分離培養患者的NP細胞和BMSCs。并將其分為兩組。A組為NP細胞單獨培養組，B組為NP細胞與BMSCs共培養組。兩組細胞均連續培養14 d。通過光學顯微鏡觀察兩組細胞形態及數量，用流式細胞儀和掃描電子顯微鏡（SEM）觀察細胞死亡。用細胞計數kit-8試劑盒（CCK8）評估細胞增殖，進一步采用實時/逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測細胞外基質（ECM）和NP細胞特殊表型的標記的表達。結果：培養14 d后，光學顯微鏡下觀察，單獨培養組可見NP細胞貼壁和延伸，NP細胞的數量比培養前多。在共培養組，NP細胞形態是紡錘形，貼壁、延伸比單培養組好，NP細胞的數量遠遠超過培養前，并且多于單獨培養組。CCK8檢測表明，培養14 d后，與單獨培養組相比，共培養組的NP細胞更多（P＜0.05），單獨培養組細胞凋亡率高于共培養組（P＜0.05）。在低氧和與BMSCs共同培養條件下，蛋白多糖（AGG）、膠原Ⅱ（COL2），SOX-9，角蛋白19（KRT19），碳酸酐酶Ⅻ（CA12）和低氧誘導因子（HIF）表達增加。……