全自動毛細管電泳技術在河源地區新生兒地中海貧血篩查的應用及價值

王葭

【摘要】 目的 研究全自動毛細管電泳技術用于河源地區新生兒地中海貧血篩查中的價值。方法 17454例河源地區新生兒為研究對象， 對全部新生兒使用Sebia全自動毛細管電泳儀進行濾紙干血斑標本的血紅蛋白（Hb）電泳， 對于檢測顯示為陽性的標本召回繼續進行常見的α、β地中海貧血基因的檢測分析。結果 17454例新生兒中檢測出2712例血紅蛋白陽性， 陽性率為15.54%；其中1879例（10.77%）α型地中海貧血， 750例（4.30%）β型地中海貧血， 異常血紅蛋白83例（0.48%）；本院召回221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本進行基因分析， 其中α地中海貧血的診斷符合率為90.05%， β地中海貧血診斷符合率為83.75%。結論 全自動毛細管電泳篩查在新生兒地中海貧血的篩查中具有較高的價值， 診斷符合率高， 有助于臨床醫師早期發現地中海貧血， 并通過基因分析分型， 早期干預治療， 確保新生兒的健康成長發育。

【關鍵詞】 毛細管電泳；地中海貧血篩查；新生兒；診斷符合率；基因分析

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.19.035

地中海貧血是非常罕見的貧血性疾病， 是因珠蛋白基因不同而出現的多類型疾病， 癥狀較為輕微的患者基本不會受到影響， 但是嚴重的則會危及生命安全[1]。根據珠蛋白基因不同， 可以將地中海貧血分成四種類型， 也即：α、β、γ、δ型地中海貧血， 其中α、β型地中海貧血較為常見[2， 3]。在發病區域上， 我國南方地區的新生兒地中海貧血發病率較高， 其會嚴重影響到患兒的正常生活。現就河源地區的17454例新生兒為例， 抽取足跟血采用全自動毛細管電泳技術進行地中海貧血的篩查， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取河源地區（五縣一區）在2016年1～6月出生的新生兒17454例為本次研究的對象， 新生兒出生3 d時抽取足跟血， 然后將血樣滴在血濾紙片上， 在自然晾干后送檢。記錄所有新生兒的檢驗結果， 將其中陽性者召回進行地中海貧血基因的檢測。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器和試劑 選擇法國Sebia公司的Capillarys2全自動毛細管電泳儀以及血紅蛋白電泳試劑盒。基因分析上采用DNA提取儀、PCR擴增儀、分子雜交儀、電泳儀以及地中海貧血基因診斷試劑盒， 由深圳亞能生物技術有限公司提供基因診斷試劑盒。

1. 2. 2 檢測方法 首先對所有血樣進行血紅蛋白電泳， 方法為：在濾紙干血斑上打1個4.84 mm2的血斑片， 然后置入到50 ml蒸餾水測試杯中進行溶解處理， 保濕過夜后于第2天將測試杯放置到電泳儀中進行檢測。將血紅蛋白電泳為陽性的血樣召回進行基因分析， 確定地中海貧血的類型。

1. 2. 3 血紅蛋白電泳陽性的判斷標準 α地中海貧血篩查陽性判斷標準：HBbarts>0.2%即為α地中海貧血篩查陽性。β地中海貧血篩查陽性判斷標準：按綜合分析法， 根據血紅蛋白組分HbA2含量、HbA含量及HbA2/HbA 比值篩查β地中海貧血陽性。見表1。

2 結果

17454例新生兒足跟血采用全自動毛細管電泳技術篩查出2712例（15.54%）血紅蛋白陽性樣本， 其中α型地中海貧血1879例， 陽性率為10.77%（1879/17454）；β型地中海貧血750例， 陽性率為4.30%（750/17454）， 異常血紅蛋白83例為0.48%（83/17454）。

血樣召回遵循就近原則， 其中本院召回221例α地中海貧血血樣進行基因分析， 確診199例為α型地中海貧血， 診斷符合率為90.05%（199/221）， 其中共有196例靜止型或輕型， 血紅蛋白H病3例。對β地中海貧血血樣召回80例在本院接受基因分析， 確診67例為β型地中海貧血， 診斷符合率為83.75%（67/80）。

3 討論

地中海貧血是指由珠蛋白生成障礙引起的遺傳性溶血疾病， 其是目前在全球分布最為廣泛且發病人數最多的一種單基因性疾病， 目前全球的地中海貧血基因攜帶者約為2億人， 且尚無治愈方法。由于地中海貧血具有非常大的異質性， 部分病情輕微的無臨床癥狀， 且不會對日常生活造成明顯的影響， 而病情嚴重的患者會存在嚴重的貧血癥狀， 生活受到嚴重影響， 甚至死亡。尤其是β型地中海貧血， 多數在出生或是出生后很長時間都不會有典型臨床癥狀， 若沒有癥狀， 且父母均未做相關檢查以及產前的診斷， 那么在出生后難以進行早期的地中海貧血診斷， 一般是在感染、炎癥時誘發貧血， 進而被發現[4]。隨著圍生期保健技術的快速發展， 在婚孕前、產前的地中海貧血篩查已普遍開展起來， 中重型地中海貧血新生兒的出生率有所降低， 但是依然有不少地中海貧血攜帶患兒出生， 尤其是南方地區， 地中海貧血發病率極高， 也有部分地區已開始開展新生兒的地中海貧血篩查， 通過血常規、血紅蛋白電泳等方法進行初篩， 然后采用基因檢測的方法對地中海貧血進行基因分型[5]。在采血進行檢測上， 由于新生兒的股靜脈、頸靜脈采血難度較大， 且新生兒較為痛苦， 因而臨床上一般采取足跟血。

正常新生兒的HbF占70%左右， HbA占30%左右， HbA2<1%；而地中海貧血新生兒的Hb組分和含量與正常新生兒不同， 通過檢驗技術將多種血紅蛋白成分、含量區分開， 從而判斷是否為地中海貧血[6]。干血斑標本目前已在多項新生兒疾病篩查中得到應用， 標本易于運輸， 尤其適用于新生兒疾病的初步篩查中[7]。正常胎兒一般在3個月的時候開始合成HbA， 在6個月的時候已增加到5%～10%， 在分娩時則可達35%～40%， 而β地中海貧血新生兒在母體發育中因β珠蛋白合成存在障礙， 從而導致HbA含量較低， 遠低于正常水平， 而且含量越低表明β地中海貧血越嚴重。所以在β地中海貧血的篩查中可以采用HbA含量高低來進行初步的篩查。在α地中海貧血的篩查中， 一般采用血常規、紅細胞脆性法進行篩查， 但是對于其中的靜止型和標準型這兩種沒有明顯血常規變化和臨床癥狀的攜帶者， 在篩查中漏診率極高， 因此并不能將血常規、紅細胞脆性法單獨用于臨床篩查中。endprint

近些年來， 不少學者提出可將全自動毛細管血紅蛋白電泳分析技術應用到新生兒地中海貧血的篩查中， 該技術是利用新生兒濾紙干血斑中的微量血紅蛋白在高壓電作用下， 在25 μm直徑的毛細管中進行血紅蛋白組分的分離， 其對血紅蛋白組分的檢測具有非常高的靈敏度和穩定性， 可以準確測定出各種血紅蛋白組分的含量， 是目前進行新生兒地中海貧血篩查最為簡便、有效的方法[8]。本研究對河源地區的17454例新生兒進行地中海貧血的篩查， 采用的是法國Sebia Capillarys2全自動毛細管電泳儀進行檢測， 該電泳儀使用的是未處理的石英毛細管電泳柱， 其能在十幾分鐘內進行血紅蛋白的常規分析， 而且無需對樣本進行處理就能得到與瓊脂糖凝膠電泳檢測相似的結果。曾有學者對這兩種電泳技術進行對比， 發現在新生兒地中海貧血篩查中， 兩種方法都具有較高的靈敏度、特異度、準確度， 在α、β地中海貧血陽性的檢測中， 兩種檢測方法的靈敏度相似， 而在HbCS和HbH上， 毛細管電泳檢測的靈敏度更高[9]。毛細管電泳技術可以直接顯示出HbH、HbCS、HbE的異常區帶， 不會與HbA、HbA2出現重疊現象， 故而準確結果非常高；而且對于血紅蛋白各個組分的分辨率非常高， 能準確檢測出組分的含量， 測出準確的百分比， 定量準確[10， 11]。而且在應用電泳儀檢測過程中， 有相關配套的質控品進行室內質控， 這樣能更好的保證結果準確性。本研究結果顯示：17454例新生兒出現血紅蛋白異常的幾率為15.54%， 其中10.77%為α地中海貧血， 4.30%為β地中海貧血， 0.48%為異常血紅蛋。本院召回的221例α地中海貧血樣本和80例β地中海貧血樣本經過檢測發現， 對于α地中海貧血的診斷符合率為90.05%， β地中海貧血診斷符合率為83.75%， 診斷符合率高。結果指出河源地區的新生兒地中海貧血發生率較高， 加強對新生兒的地中海貧血篩查具有重要意義。

綜上所述， 全自動毛細管電泳技術在河源地區新生兒地中海貧血的篩查中應用具有重大價值， 診斷符合率高， 且操作簡單、耗時短、成本低， 可以作為新生兒地中海貧血篩查的重要手段。

參考文獻

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[收稿日期：2017-03-13]endprint