阻斷EGFR影響肺鱗癌腫瘤微環(huán)境Treg細(xì)胞及IL-1A表達(dá)

何海洋 齊陸玉 侯伊玲

表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）、結(jié)直腸癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌中經(jīng)常過表達(dá)或者突變，因而是阻斷此類癌細(xì)胞增殖生存的有效靶點(diǎn)。藥物通過與EGFR特異結(jié)合，減少腫瘤的血管生成與癌癥的發(fā)展，阻斷細(xì)胞周期以誘導(dǎo)凋亡[1]。在臨床中，EGFR活性通過酪氨酸激酶抑制劑（吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼）或是特異抗體（西妥昔單抗、帕尼單抗）阻斷。然而EGFR阻斷劑治療常伴隨劑量限制的持續(xù)性副反應(yīng)——皮膚炎癥（丘狀膿包性皮疹和瘙癢）及腸道炎癥[2]，引起這一副反應(yīng)的原因之一為EGFR不僅表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，也在正常上皮組織表達(dá)。最近有遺傳實(shí)驗(yàn)結(jié)果[3,4]表明，角質(zhì)細(xì)胞衍生的趨化因子誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致皮膚皮疹，因而提出一種可能性，即在藥物干預(yù)的情況下，功能性EGFR缺失，可以改變腫瘤免疫微環(huán)境。近段時(shí)間以來，免疫檢點(diǎn)（CTLA-4、PD-1/PD-L1）抑制劑用于癌癥治療試驗(yàn)證實(shí)特定的免疫環(huán)境是腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)或被消滅的決定因素之一[5]。為了模擬EGFR消失對(duì)鱗狀細(xì)胞肺癌腫瘤微環(huán)境的影響，我們使用基因及藥物手段在FVB/N免疫小鼠身上進(jìn)行了一系列試驗(yàn)。

1 材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 HRAS（sc-520）購(gòu)于Santa Cruz；EGFR（06-847）購(gòu)于Millipore；ACK 緩沖液購(gòu)于Thermo Fisher；綠色或藍(lán)色活體染色劑購(gòu)于Life Technologies；Foxp3 Fix/Perm購(gòu)于ebiosciences；TRIzol試劑購(gòu)于Life Technologies；SuperScript? III反轉(zhuǎn)錄酶購(gòu)于Life Technologies；流式抗體FoxP3-AF488、PD1-PE、CD25-AF700、CD45-PECF594、CD3-APC、CD4-PCPCy5.5、CD8-APCCy7購(gòu)于BD；抗蛋白酶購(gòu)于Roche；定制的磁珠組合購(gòu)于R&D luminex；iQ SYBR Green Supermix購(gòu)于Biorad；管過濾（352235）購(gòu)于BD；實(shí)驗(yàn)引物來自Quantitech Qiagen，流式細(xì)胞儀使用BD LSRII；實(shí)時(shí)定量PCR使用Bio-Rad iCycler iQ。

1.2 細(xì)胞修飾 通過腫瘤細(xì)胞自主（遺傳）和系統(tǒng)性（藥物干預(yù)）模型，給新生的小鼠移植以下修飾的角質(zhì)細(xì)胞以成瘤：通過逆轉(zhuǎn)錄病毒連續(xù)5 d轉(zhuǎn)染HRAS至EGFRwt/wt與EGFRflx/flx角質(zhì)細(xì)胞以形成具有持續(xù)HRAS活性的改造細(xì)胞[6,7]。……