miRNA-21與高血壓并腔隙性梗死的相關性及預測價值

孫繼紅 張衛國 張 娟 李貴琦 孫慎杰 宋恒良 萬大國

鄭州大學第二附屬醫院心血管內科，河南 鄭州 450014

·論著 臨床診治·

miRNA-21與高血壓并腔隙性梗死的相關性及預測價值

孫繼紅 張衛國 張 娟 李貴琦 孫慎杰 宋恒良 萬大國△

鄭州大學第二附屬醫院心血管內科，河南 鄭州 450014

目的 探討微小RNA-21(miR-21)與高血壓伴腔隙性梗死(腔梗)的相關性及診斷預測作用。方法 將67例高血壓患者根據是否合并腔梗分為高血壓組31例和高血壓并腔梗組36例，收集各項臨床和實驗室指標，采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)測量血清miR-21；繪制受試者工作曲線(ROC)，評價miR-21對高血壓并腔梗的診斷預測價值，通過Pearson相關分析了解miR-21與頸動脈IMT的相關性。結果 高血壓并腔梗組miR-21表達(2.08±0.61)，顯著高于高血壓組(1.25±0.37，P<0.05)。miR-21對高血壓發生腔梗的ROC曲線下面積(AUC)為0.871，95%可信區間(CI)0.787～0.954(P<0.05)。Pearson相關分析發現miR-21與頸動脈IMT呈正相關(R=0.763，P<0.05)。結論 miR-21在高血壓并腔隙性腦梗死患者中高表達，是高血壓發生腔梗的獨立預測因素，可作為高血壓發生腔梗的一個簡便、無創、有效的血清學診斷預測指標。

高血壓；腔隙性梗死；miRNA；miRNA-21

發現miRNA是一類高度保守的內源性非編碼小RNA，一般由20～23個核苷酸組成，在轉錄后水平調控目的基因的表達水平[1]。本研究旨在驗證miR-21對高血壓發生腔梗的預測價值，以期為今后在診斷和治療高血壓發生腔梗提供一定的指導意義。

1 對象與方法

1．1 研究對象 選擇2014-09—2016-09在鄭州大學第二附屬醫院就診的初診高血壓患者67例，男43例，女24例，年齡(61.6±13.7)歲，其中高血壓患者無腔梗組31例和高血壓合并腔梗組36例。高血壓診斷符合《中國高血壓防治指南2010》標準[2]。排除標準：繼發性高血壓；合并冠心病、糖尿病；正在或已經服用了降壓藥物；肝腎功能異常；不配合隨訪和不簽知情同意者。

1．2 研究方法

1．2．1 血標本采集與處理：受檢者空腹12 h后，抽取前臂靜脈血3 mL共2管，用于由奧林巴斯AU5800全自動生化分析儀進行化驗分析，包括：血生化、血糖、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白；另一管，4 ℃ 3 000 r/min離心10 min，取血清于無RNA酶管中，-80 ℃保存供后續實驗使用。

1．2．2 qRT-PCR：采用Trizol法常規提取外周血血漿樣品的總RNA，放-80 ℃備用。按照逆轉錄試劑盒說明書進行逆轉錄，RNA濃度通過nanodrop紫外分光光度計測量，用于實時熒光定量PCR的檢測。按SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)試劑盒說明書進行操作，反應條件：95 ℃變性5 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，重復35個循環用于qRT-PCR檢測。采用2-△△CT 法表示目的基因的相對表達量。1．3 統計學方法 采用SPSS 17.0軟件包進行數據處理，計量資料以均數±標準差表示，兩組間比較用獨立樣本t檢驗，分類變量資料采用卡方檢驗。通過受試者工作特征(ROC)曲線評價miR-21對高血壓發生腔梗的預測價值，通過Pearson相關分析了解miR-21與頸動脈IMT的相關性，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2．1 入選人群一般資料和臨床血生化指標 見表1。

表1 患者一般資料和臨床生化資料

注：GLU：葡萄糖；TG：甘油三酯；TC：總膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇

2．2 qRT-PCR結果 如圖1所示，通過qRT-PCR檢測，miR-21在腔梗組患者中的相對表達量分別為(2.08±0.61)，顯著高于無腔梗組(1.25±0.37)，差異有統計學意義(P<0.05)。

2．3 miR-21對高血壓腔隙性腦梗塞的預測價值 以miR-21為檢測變量，以是否出現腔隙性腦梗塞為狀態變量，定義狀態變量為1，利用ROC曲線分析miR-21對腔隙性梗死的預測價值。結果顯示：曲線下面積(AUC)為0.871，95%CI0.787～0.954，(P<0.05)。miR-21對腔隙性梗死有較好的預測價值，相應結果見圖2。

2．4 miR-21表達水平與2組患者頸動脈IMT的關系 我們對臨床上經常采用的反應動脈硬化的頸動脈IMT和miR-21進行Pearson相關分析，發現miR-21與頸動脈IMT呈正相關(R=0.763，P<0.05)。

圖1 2組人群中miR-21的相對表達量 圖2 血清miR-21水平診斷腔隙性梗死的ROC曲線

3 討論

腔隙性梗死是高血壓患者中常見的腦血管疾病，發病率約占缺血性腦卒中的24%，而造成腔隙性梗死最常見的原因是腦小動脈的粥樣硬化。在其病理變化中，血管管壁基底膜增厚，深部白質動脈粥樣硬化，微血管內皮細胞功能失調，血管狹窄閉塞，進而引起腦動脈遠端的血流減少。

自從miRNAs被發現以來，越來越多的研究揭示循環miRNAs可能在動脈粥樣硬化的各個發病環節起著非常重要的作用，特定miRNA可能是血管病理生理過程中的關鍵調節基因[3]，包括血管的增殖、遷移、氧化應激和血管炎癥反應[4]。miR-21可促進血管平滑肌細胞增殖，抑制凋亡，具有促生長作用。而血管平滑肌細胞的增殖、凋亡、去分化和遷移等行為已被證實在動脈粥樣硬化的發展和血管再狹窄中起著重要的作用[5]。此外，miR-21可以促進內皮細胞向間充質的轉化，進而影響血管內皮的穩態。因此我們推測miR-21有可能在腔隙性腦梗塞的發病過程中發揮了重要的作用。

大量的研究表明頸動脈IMT與動脈粥樣硬化存在良好的線性關系，能較早反應動脈粥樣硬化的發生，是缺血性卒中獨立的危險因素。在本項研究中，我們參照2010中國高血壓病防治指南所提出的IMT大于0.9 mm為頸動脈內膜IMT增厚，IMT大于1.3 mm為頸動脈內膜粥樣斑塊形成。我們的研究發現，miR21在高血壓合并腔梗的患者外周循環中表達顯著高于單純高血壓患者，進一步的相關研究發現，miR-21表達水平與頸動脈IMT厚度呈正相關，提示miR-21表達水平的升高同時可能會促進頸動脈IMT的增厚。

本研究發現，miRNA-21在高血壓并腔梗患者中表達水平顯著上調，對高血壓發生腔梗預測的ROC曲線下面積為0.871，對高血壓左心室發生腔梗有很好的預測價值，有望成為一個具體敏感的，非侵入性的診斷工具。

[1] Condorelli G，Latronico MV，Cavarretta E，et al．microRNAs in cardiovascular diseases：current knowledge and the road ahead[J]．J Am Coll Cardiol，2014，63(21)：2 177-2 187．

[2] 中國高血壓防治指南修訂委員會．中國高血壓防止指南[J]．中華高血壓雜志，2011，39(7)：579-616．

[3] Fichtlscherer S，De Rosa S，Fox H，et al．Circulating microRNAs in patients with coronary artery disease[J]．Circulation research，2010，107(5)：677-684．

[4] Fish JE，Srivastava D．MicroRNAs：opening a new vein in angiogenesis research[J]．Science signaling，2009，2(52)：pe 1．

[5] Kwangho Kim，Sunghwan Kim，Sang Hyun Moh，et al．Kaempferol inhibits vascular smooth muscle cell migration by modulating BMP-mediated miR-21 expres-sion[J]．Mol Cell Biochem，2015，407(1-2)：143-149．

(收稿2017-07-10)

責任編輯：王喜梅

Relation and diagnosis of miRNA-21 for being used as a prediction target molecular marker of lacunar infarction with hypertension

SunJihong，ZhangWeiguo，ZhangJuan，LiGuiqi，SunShenjie，SongHengliang，WanDaguo

DepartmentofCardiology，TheSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014，China

Objective To investigate the expression and diagnosis of miRNA-21 for being used as a prediction target molecular marker of lacunar infarction with hypertension．Methods 67 cases of patients with hypertension was divided into hypertension group (31 cases) and hypertension with lacunar infarction group (36 cases)．Then measured serum miR-21 using real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) and collected the clinical and laboratory indexes；evaluated miR-21 predictive value to the diagnosis of hypertension with lacunar infarction through receiver operator characteristic curve (ROC)．Then studied the pertinence of miR-21 and the carotid artery intima-media thickness (IMT) using Pearson correlation analysis．Results The expression of miR-21 in serum of hypertension with lacunar infarction patients was significantly higher than that of the hypertension group(2.08±0.61VS．1.25±0.37，P<0.05．ROC analysis results showed that the area under the ROC(AUC) was 0.871，and 95% confidence interval(95%CI)was 0.787～0.954．Pearson correlation analysis found that miR-21 and carotid IMT were positively correlated (R= 0.763，P<0.05)．Conclusion The serum level of miR-21 in hypertension with lacunar infarction was significantly higher than that in hypertension patients．The miR-21 has certain predictive value of lacuncar infarction in hypertension．

Hypertension；Lacunar infarction；miRNA；miRNA-21

R743

A

1673-5110(2017)13-0044-03

△通信作者：萬大國(1965-)，教授，主任醫師，研究方向：冠心病的介入治療，心內電生理檢查及射頻消融術，永久起搏器置入術，先心病及瓣膜病的介入，Email：wandaguo@hotmail.com