外周血有核紅細胞數量與缺氧缺血性腦病新生兒腦損傷相關指標的關系

喬 健，姜東林，龔 芳，陳小倩，李成萬△

(1.南通大學第三附屬醫院兒科，江蘇無錫 214041；2.蘇州大學附屬兒童醫院新生兒科，江蘇蘇州 215003)

外周血有核紅細胞數量與缺氧缺血性腦病新生兒腦損傷相關指標的關系

喬 健1，姜東林1，龔 芳1，陳小倩2，李成萬1△

(1.南通大學第三附屬醫院兒科，江蘇無錫 214041；2.蘇州大學附屬兒童醫院新生兒科，江蘇蘇州 215003)

目的 探討外周血有核紅細胞(NRBC)數量與缺氧缺血性腦病(HIE)新生兒腦損傷相關指標的關系。方法 選取2013年2月至2015年4月南通大學第三附屬醫院與蘇州大學附屬兒童醫院收治的HIE患兒29例(HIE組)，非HIE窒息新生兒27例(窒息組)及健康新生兒24例(對照組)，均于娩出后24 h內檢測外周血NRBC數量、S100B蛋白、神經元特異性烯醇化酶(NSE)及腦型肌酸激酶同功酶(CK-BB)水平進行比較，并分析NRBC數量與S100B蛋白、NSE及CK-BB水平的相關性。結果 HIE組患兒外周血NRBC數量及腦損傷相關指標(S100B蛋白、NSE及CK-BB)水平均高于窒息組和對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)；HIE重度患兒外周血NRBC數量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于輕度和中度患兒，差異均有統計學意義(P<0.01)；且HIE患兒外周血NRBC數量與S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相關(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。結論 外周血NRBC數量能夠反映HIE新生兒的腦損傷，且檢測簡便，可用于HIE的早期輔助診斷。

缺氧缺血，腦 ；新生兒；腦損傷；有核紅細胞

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)指新生兒在圍產期由于缺血缺氧而導致的腦部損傷性疾病，極易導致新生兒的智力障礙、腦癱甚至死亡[1]。對于新生兒HIE的救治在于早發現、早治療，盡早診斷出新生兒的腦損傷從而進行有效干預，可避免或減少神經系統后遺癥的產生。有核紅細胞(nucleated red blood cell，NRBC)為幼紅細胞，在新生兒外周血中少量存在，現有研究表明外周血NRBC數量與窒息相關[2-3]。本研究觀察了窒息致HIE新生兒外周血NRBC數量與S100B蛋白、神經元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)及腦型肌酸激酶同功酶(creatine kinaes BB isozyme,CK-BB)等腦損傷相關指標的關系，以期為HIE的早期輔助診斷提供指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年2月至2015年4月南通大學第三附屬醫院新生兒科及蘇州大學附屬兒童醫院新生兒科因窒息住院的新生兒56例，均符合新生兒窒息的診斷標準[4]。其中，被臨床診斷為HIE的新生兒29例(HIE組)，男13例，女16例；HIE輕度12例，中度11例，重度6例；診斷為窒息無HIE的新生兒27例(窒息組)，男16例，女11例。HIE的臨床診斷符合2005年新生兒學組會議制定的HIE診斷依據。HIE分度：輕度表現為興奮抑制交替，肌張力正?；蛏愿撸捎屑￡嚁?，瞳孔正?；驍U大，原始反射、中樞性呼吸衰竭及腦電圖(EEG)正常；中度表現為嗜睡，肌張力及原始反射減弱，常有驚厥，有中樞性呼吸衰竭，瞳孔縮小，EEG表現為低電壓；重度表現為昏迷，肌張力表現為松軟或間歇性伸肌張力增高，原始反射消失，伴有驚厥，中樞性呼吸衰竭明顯，瞳孔不對稱或擴大，對光反射遲鈍，EEG呈現爆發抑制，等電線[5]。排除標準：排除伴有感染性疾病、中樞系統畸形、先天性心臟病、呼吸系統疾病患兒。對照組選擇健康新生兒24例，男11例，女13例。3組在體質量、胎齡、性別及分娩方式上比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。

1.2 方法 窒息新生兒于娩出后24 h內抽取股靜脈血3 mL，健康新生兒在娩出后24 h內抽取臍靜脈血或股靜脈血3 mL，所有標本均分兩管置于含10%乙二胺四乙酸二鈉30 μL和抑肽酶40 μL的試管中?；靹蚝笃渲?管用于NRBC計數，另外1管3 000 r/min離心5 min后分離血漿，-70 ℃保存用以批量檢測。NRBC計數應用瑞氏-姬姆薩染色后計算每100個白細胞中NRBC的數量；外周血S100B蛋白與CK-BB濃度檢測均采用酶聯免疫吸附試驗(ELLSA)，S100B蛋白檢測試劑盒購自瑞典康乃格診斷公司，CK-BB檢測試劑盒購自上海北加生化試劑有限公司，檢測儀器均為Bio-Rad Model550型酶標儀(美國Bio-Rad公司)；NSE濃度檢測采用電化學發光免疫法，試劑盒購自美國Beckman Coulter公司，檢測儀器為Elecsys 2010全自動免疫分析儀(美國Roche公司)。具體操作按照試劑盒及儀器操作說明書進行。

2 結 果

2.1 3組外周血各項觀察指標比較HIE組外周血NRBC計數、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于窒息組與對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)；窒息組與對照組上述各項指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2 不同程度HIE患兒各項觀察指標比較 重度HIE新生兒外周血NRBC數量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于輕度及中度HIE新生兒，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表2。

2.3 相關性分析 相關性分析顯示，HIE新生兒外周血NRBC數量與腦損傷指標S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相關(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。

表1 3組外周血各項觀察指標比較

*：P<0.01，與HIE組比較；#：每100個白細胞中NRBC的數量。

表2 不同程度HIE患兒外周血各項觀察指標比較

*：P<0.01，與重度患兒比較；#：每100個白細胞中NRBC的數量。

3 討 論

NRBC作為未成熟紅細胞，是胎兒造血系統及胎兒血液循環的一個特征性標記，在圍產期隨著胎兒造血系統的逐漸發育成熟，其外周血液循環中的NRBC僅有少量存在[6]。S100B蛋白、NSE及CK-BB均與腦的能量代謝有關：S100家族中的S100B蛋白是中樞神經中主要且最有活性的成員，主要存在于腦神經膠質細胞與Schwann細胞，其可通過調節蛋白激酶C和鈣調蛋白的磷酸化及RNA的合成調節細胞能量代謝[7]；NSE是在神經內分泌細胞和神經元中催化能量代謝糖酵解過程中磷酸烯醇式丙酮酸與2-磷酸甘油酸互相轉化的關鍵酶；CK-BB也是腦神經細胞及星形膠質細胞能量代謝中的重要催化酶。在發生缺氧缺血性腦損傷時，腦組織細胞膜的完整性遭到破壞，細胞內高濃度的S100B蛋白、NSE及CK-BB則被釋放到腦脊液中，而由于新生兒的血腦屏障發育還不完善或直接受損，外周血會出現S100B蛋白、NSE及CK-BB的明顯升高[7-9]。而在缺氧缺血的條件下，機體需要更多的血紅蛋白參與攜氧，這就使得機體內的紅細胞需求增加，反饋刺激造血系統加速紅細胞的生成與釋放，從而使得紅細胞未成熟就被釋放進入外周血中，使得外周血NRBC計數出現增高[10]。

對于腦損傷的評估，現有的輔助檢查常有腦電圖、B型超聲、CT及磁共振成像(MRI)等，均是從電生理及影像學角度去評估，檢查時限各有不同，腦電圖在出生后1周內檢查，B型超聲可在HIE的72h內開始檢查，CT待患兒生命體征穩定后檢查，一般以生后4～7d為宜，而MRI在生后1d即可檢查，均存在檢查時間滯后、檢查時間長或費用過高等缺點。本研究所選擇的檢測手段為血清學檢測，檢測時間為出生后24h內。研究發現在該時間段內HIE組外周血NRBC計數、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明顯高于窒息組與對照組(P<0.01)，而窒息組與對照組上述各指標比較差異均無統計學意義(P>0.05)，說明HIE新生兒早期的腦損傷已經在S100B蛋白、NSE及CK-BB等指標上反映出來，同時早期的缺血缺氧已使HIE新生兒外周血NRBC計數升高到足以區分健康和僅有窒息的新生兒。在HIE的分度比較中，重度HIE新生兒外周血NRBC數量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明顯高于輕度及中度患兒(P<0.01)，說明新生兒外周血NRBC數量及上述腦損傷指標能夠反映HIE新生兒的嚴重程度,這與國內外的其他研究相一致[10-11]。相關性分析顯示，HIE新生兒外周血NRBC計數與腦損傷指標S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈明顯正相關(P<0.01)，這可能說明在相同的病理因素作用下(缺血缺氧)，反饋刺激外周血NRBC數量的增高程度與腦損傷的嚴重程度是協調一致的，外周血NRBC數量能夠反映腦損傷的嚴重程度，但確切的病理機制還需要進一步探討。在臨床上，檢測外周血NRBC數量用血量少，簡便快捷，更適合于早期開展。

綜上所述，新生兒外周血NRBC數量的增高能夠反映腦損傷的存在，同時該檢測方法簡便快捷，這對于早期篩查HIE及判斷疾病的嚴重程度具有重要意義。

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無錫市醫院管理中心醫學科研項目(YGZXM14025)。 作者簡介：喬健(1970-)，副主任醫師，碩士，主要從事新生兒腦損傷方面研究。△

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.35.033

R722.12

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1671-8348(2016)35-5004-02

2016-07-13

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