DEC1 和HIF—1α在喉咽部鱗狀細胞癌中的表達及意義

摘要：目的 探討分化型胚胎軟骨發育基因1（Differentiated embryo–chondrocyte expressed gene 1，DEC1）和低氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）在喉咽部鱗狀細胞癌組織中的表達及臨床意義。方法 運用免疫組織化學法檢測60例喉咽部鱗癌組織和相應癌旁正常黏膜中DEC1和HIF-1α表達情況，分析它們的臨床意義。結果 DEC1和HIF-lα在癌中的陽性表達率分別為88.33%和63.33%，相應癌旁正常上皮分別為3.33%和0%，差異有統計學意義（兩者P<0.05）。DEC1表達在高與中低分化，Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期，有無淋巴結轉移間差異具有統計學意義（全部P<0.05）且與中低分化、臨床分期及淋巴結轉移呈正相關關系（全部P<0.05）。HIF-lα與淋巴結轉移密切相關（P<0.05）。結論 DEC1和HIF-lα可能參與喉咽部鱗狀細胞癌的發生和發展，并與腫瘤的侵襲和轉移密切密切相關。

關鍵詞：喉咽部鱗狀細胞癌；分化型胚胎軟骨發育基因1；低氧誘導因子-1α

中圖分類號：R780.2 文獻標識碼：A

喉咽部鱗狀細胞癌是具有明顯的局部浸潤、容易發生淋巴結轉移和復發傾向。研究其侵襲和轉移的機制具有重要臨床意義。DEC1被證實參與調控細胞分化、增殖、凋亡、低氧、免疫應答和生物節律，并且在多種腫瘤的形成和演進具有重要作用[1-2]。HIF-1α與細胞缺氧誘導產生的轉錄活化密切相關，在促進腫瘤增殖、轉移中具有重要作用[3]。有研究顯示DEC1和HIF-1α具有密切調節關系[4]，目前DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗狀細胞癌中的研究甚少，本文采用免疫組織化學法檢測DEC1和HIF-1α在60例喉咽部鱗狀細胞癌的表達，探討DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗狀細胞癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 60例喉咽部鱗狀細胞癌及相應癌旁正常黏膜石蠟組織，來自廣州市增城區人民醫院耳鼻喉科2010年9月～2014年12月期間診治的患者，全部病例結果病理確診。男性41例，女性19例，年齡38～67歲，年齡≤50歲19例，>50歲41例，高分化23例，中分化31例，低分化6例，有淋巴結轉移20例，無淋巴結轉移40例，根據WHO臨床分期標準分I期15例，II期22例，III期18例，IV期5例。所有標本均來自手術患者，患者術前均未進行放、化療。組織4%中性緩沖甲醛固定，常規石蠟包埋，DEC1和HIF-1α一抗購自美國Sigma，快捷型酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物，DAB顯色試劑盒，檸檬酸鹽抗原修復液，PBS粉劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.2免疫組織化學 石蠟組織3 μm厚切片，免疫組織化學采用EnvisionTM法進行檢測DEC1表達。切片經過檸檬酸鹽液高壓鍋抗原修復，DEC1和HIF-1α分別以1∶500和1∶100濃度稀釋使用，37℃孵育1h，快捷型酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物孵育15 min，DAB鏡下控色，蘇木素復染細胞核，常規封片。

1.3結果判斷 DEC1陽性表達主要定位在細胞漿，顯示為棕黃色顆粒沉淀。所有結果由兩位高年資病理醫師進行獨立雙盲觀察，判斷標準參照文獻[5]。HIF-1α陽性判斷標準：細胞核呈棕黃或棕褐色著色，染色評分參照文獻[6]。

1.4統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析，DEC1表達情況與喉咽部鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系采用Pearson χ2檢驗分析，相關性分析采用Spearman's等級相關分析，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 DEC1和HIF-1α在喉咽部鱗癌中的表達DEC1和HIF-1α在60例喉咽部鱗狀細胞癌中分別有53例和38例陽性表達，見圖1和圖2，陽性率分別是88.33%和63.33%，DEC1在喉咽部正常黏膜上皮中絕大部分呈陰性表達，僅有2例呈弱陽性表達，陽性表達率3.33%，HIF-1α在正常黏膜上皮全部陰性表達，DEC1和HIF-1α在癌和正常上皮之間的表達差異具有統意義（兩者P<0.05）。

2.2 DEC1和HIF-1α與臨床病理參數的關系 DEC1陽性表達率在喉咽部鱗狀細胞癌高分化與中低分化，Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期，有與無淋巴結轉移間差異具有統計學意義（全部P<0.05），而與年齡、性別、腫瘤大小間的差異不具有統計學意義（全部P>0.05），相關性分析顯示DEC1與中低分化、臨床分期及淋巴結轉移呈正相關關系（全部P<0.05）。HIF-1α與淋巴結轉移密切正相關（P<0.05），與年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、分化程度無關（全部P>0.05）。

3 討論

DEC1蛋白由412個氨基酸組成，通過其磷酸化位點的激活發揮生理調節功能。DEC1在正常組織如肝臟、腸道和軟骨等有廣泛的表達，在機體中發揮著重要的生理功能，例如免疫應答、神經發育、生物鐘調控和細胞分化等[7]。在腫瘤發生機制中，DEC1在不同組織類型和來源的功能有所不同，所起的作用可能存在差異。例如在結腸癌中DEC1呈高表達[8]；但在肺癌中，有關DEC1的表達的報道存在兩種相反的結 論[9-10]，這說明DEC1在腫瘤中的作用機制尚待深入研究。

目前DEC1在喉咽部鱗狀細胞癌中的研究罕見。本研究結果顯示DEC1在喉咽部鱗狀細胞癌的陽性表達率88.33%，明顯高于癌旁正常黏膜中的3.33%，這提示DEC1表達與腫瘤的發生有關。并且中低分化的陽性表達明顯高于高分化病例，Ⅲ+Ⅳ期病例表達明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結轉移病例的DEC1表達明顯高于無淋巴結轉移。進一步相關性分析顯示DEC1與中低分化、臨床分期及淋巴結轉移呈正相關關系，DEC1與年齡、性別、腫瘤大小無關，這些提示DEC1不受性別、年齡和腫瘤大小等影響，而與腫瘤的侵襲、轉移能力有關。

腫瘤的惡性快速增殖往往導致腫瘤局部處于缺氧狀態， HIF-1α屬于重要的缺氧標記物，它多種惡性腫瘤中表達增高，激活后可以調控下游多種靶基因的轉錄，維持腫瘤細胞的無氧代謝，促進新生血管形成，會促進腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移[11]。本研究中HIF-1α在癌中的表達高于正常黏膜上皮，并且與淋巴結轉移密切相關，提示HIF-1α在喉咽部鱗狀細胞癌的發生、侵襲和轉移起到重要作用。分析全文可以推測DEC1和HIF-lα可能參與喉咽部鱗狀細胞癌的發生和發展，并與腫瘤的侵襲和轉移密切密切相關。進一步研究它們在喉咽部鱗狀細胞癌中的作用及相互關系，可能對喉咽部鱗狀細胞癌的防治具有潛在重要價值。

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編輯/肖慧