柚皮苷抗大鼠乙酸型胃潰瘍的作用及其對(duì)胃黏膜TFF2表達(dá)的調(diào)控*

秦建設(shè)，鄭 波

(重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校 404120)

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·經(jīng)驗(yàn)交流·

柚皮苷抗大鼠乙酸型胃潰瘍的作用及其對(duì)胃黏膜TFF2表達(dá)的調(diào)控*

秦建設(shè)，鄭 波△

(重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校 404120)

目的 通過(guò)測(cè)定乙酸型胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織中三葉因子2(TFF2)的表達(dá)，探討柚皮苷對(duì)胃潰瘍的治療作用。方法 60只SPF級(jí)SD大鼠分成6組，即對(duì)照組、模型組，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組和蘭索拉唑組(3mg/kg)。制作乙酸型胃潰瘍模型。連續(xù)給藥1周后處死大鼠，采集標(biāo)本。結(jié)果 與模型組相比，柚皮苷中、高劑量組血清及胃黏膜中TFF2表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)；蘭索拉唑?qū)ρ寮拔葛つぶ蠺FF2表達(dá)的增效不明顯(P>0.05)。結(jié)論 柚皮苷具有抗胃潰瘍作用，其作用機(jī)制可能與提高胃組織中TFF2的水平有關(guān)。

柚皮苷；胃潰瘍；三葉因子2

柚皮苷全稱為柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又稱柚苷、柚皮素，是一種雙氫黃酮類化合物，是陳皮、枳實(shí)、青皮等中藥的主要有效成分之一。現(xiàn)代研究表明，柚皮苷具有抗氧化、抗腫瘤、解痙鎮(zhèn)痛、降血脂、調(diào)節(jié)血糖等生物活性和藥理作用[1-3]。2013年，柚皮苷被國(guó)家批準(zhǔn)作為一類新藥進(jìn)入臨床試驗(yàn)。大量藥物成分分析研究顯示，對(duì)胃潰瘍有治療作用的很多中成藥，如健脾舒胃凝膠、胃蘇顆粒、胃炎靈顆粒等中均檢測(cè)出含有大量的柚皮苷成份[4-6]。但是，有關(guān)柚皮苷對(duì)胃潰瘍的治療作用研究文獻(xiàn)比較少見(jiàn)。本文旨在研究柚皮苷對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷的保護(hù)作用，特別是對(duì)胃黏膜保護(hù)因子TFF2的影響，進(jìn)一步闡明柚皮苷的藥理作用，為治療胃潰瘍提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級(jí)(SPF)4個(gè)月齡SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(渝)2012-0005。將大鼠分為對(duì)照組，模型組，柚皮苷低劑量組、中劑量組、高劑量組，蘭索拉唑組，每組分別10只。

1.2 藥物試劑與主要儀器 柚皮苷(編號(hào)：101291319，Sigma公司)，TFF2試劑盒(編號(hào)：AK0014FEB26008，武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)，蘭索拉唑片(規(guī)格：15mg，批號(hào)：120623，重慶科瑞制藥有限公司)，柚皮苷用羚甲基纖維素納(CMC)制成100%柚皮苷懸濁液。Bio-TekELX800多功能酶標(biāo)儀(美國(guó))，H-1850R湘儀高速離心機(jī)。

1.3 方法

1.3.1 模型制備 用改良Okabe法制作乙酸型胃潰瘍模型[7-8]。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射進(jìn)行麻醉，在劍突下沿正中線作2～3cm的正中切口，打開(kāi)腹腔，將胃輕輕拉出，用1mL注射器在胃前壁胃小彎角切跡下方刺入漿膜下注入0.1mL100% 的乙酸，以出現(xiàn)白點(diǎn)為度，然后用細(xì)棉簽將溢出乙酸吸凈，用含生理鹽水清洗，將胃小心地納入腹腔，逐層縫合創(chuàng)口。術(shù)后當(dāng)日給大鼠自由飲水，次日開(kāi)始自由飲食。

1.3.2 給藥方法 造模次日開(kāi)始給藥：模型組給予生理鹽水1mL/100g灌胃；柚皮苷低劑量組給予50mg/kg灌胃；柚皮苷中劑量組給予100mg/kg灌胃；柚皮苷高劑量組給予200mg/kg灌胃；蘭索拉唑組給予3mg/kg。每天 1 次，連續(xù)給藥 1 周。對(duì)照組正常飲食。

1.3.3 標(biāo)本采集與處理 給藥1周后，所有組別大鼠禁食24h后，進(jìn)行腹腔麻醉，開(kāi)腹采用腹主動(dòng)脈取血方法收集血液標(biāo)本，取血后室溫靜置1h后3 500r/min離心10min，吸出上層血清存放在-85 ℃冰箱保存。沿胃大彎剪開(kāi)，以生理鹽水沖洗后，觀察胃潰瘍狀況，測(cè)量胃潰瘍面積。胃黏膜用組織勻漿器勻漿后離心，吸出上層澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.3.4 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.4.1 潰瘍面積 用游標(biāo)卡尺測(cè)出潰瘍的最長(zhǎng)徑和最寬徑，兩者相乘計(jì)算出潰瘍面積。

1.3.4.2TFF2測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，用多功能酶標(biāo)儀(Bio-TekELX800，美國(guó))，按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清與胃黏膜組織液中TFF2水平。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)變化 肉眼下，模型組、柚皮苷低劑量組均可見(jiàn)明顯的潰瘍面，中劑量組、高劑量組與蘭索拉唑組潰瘍面積明顯減少。經(jīng)計(jì)算模型組潰瘍面積指數(shù)最高，與模型組相比，柚皮甘中、高劑量組和蘭索拉唑組潰瘍指數(shù)均明顯降低(P<0.01)，且柚皮苷高劑量組和蘭索拉唑組療效明顯優(yōu)于柚皮苷低、中劑量組(P<0.01)，但柚皮苷高劑量組與蘭索拉唑組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜組織TFF2的變化 與模型組相比，柚皮苷低、中、高劑量給藥組大鼠血清及胃黏膜組織中TFF2水平均有增加，但柚皮苷中劑量、高劑量組效果明顯(P<0.05)。相比柚皮苷低劑量組，柚皮苷高劑量組效果更明顯(P<0.05)。蘭索拉唑組對(duì)血清和胃黏膜中TFF2的調(diào)控作用效果不明顯，見(jiàn)表2。

表1 各組胃潰瘍大鼠潰瘍指數(shù)變化

a：P<0.01，與模型組相比；b：P< 0.01，與柚皮苷低劑量組比較；c：P< 0.01，與柚皮苷中劑量組比較；-：無(wú)數(shù)據(jù)。

表2 各組大鼠血清及胃黏膜組織液中TFF2 的變化

a:P<0.01，、與對(duì)照組比較；b：P<0.05，與模型組比較；c：P<0.05，與蘭索拉唑組比較；d：P<0.05，與柚皮苷低劑量組比較。

3 討 論

胃潰瘍是一種臨床消化系統(tǒng)的常見(jiàn)病、多發(fā)病，其致病因素復(fù)雜，病理機(jī)制迄今未完全清楚。胃潰瘍后的修復(fù)與愈合，也是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程，黏膜愈合的質(zhì)量直接影響到疾病的轉(zhuǎn)歸。大量研究表明，胃黏膜的修復(fù)過(guò)程是多種細(xì)胞、生長(zhǎng)因子及細(xì)胞外基質(zhì)相互作用的復(fù)雜過(guò)程。而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保護(hù)因子減少是形成胃潰瘍的重要病理基礎(chǔ)。TFF2作為胃黏膜細(xì)胞分泌的重要保護(hù)因子，在胃潰瘍的產(chǎn)生與修復(fù)過(guò)程中具有重要的作用。TFF2是一種具有三葉草型結(jié)構(gòu)域的小分子蛋白質(zhì)，其與TFF1、TFF3都是TFF家族中最重要的成員。大量研究表明，TFF的主要表達(dá)位點(diǎn)在胃腸道,是由胃腸道黏膜細(xì)胞分泌產(chǎn)生，TFF1、TFF2主要分布在胃竇部,TFF3主要分布在小腸和大腸[9-10]。近年國(guó)內(nèi)外研究顯示,TFF2表達(dá)的部位和水平與胃潰瘍的關(guān)系非常密切,其主要作用機(jī)制為： TFF2能促進(jìn)胃黏液糖蛋白的分泌，并能與黏液糖蛋白結(jié)合生成具有保護(hù)作用的復(fù)合物，進(jìn)而能避免胃黏膜上皮細(xì)胞遭受酸和酶的侵襲，同時(shí)能與表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等相關(guān)胃黏膜保護(hù)因子相互協(xié)同，共同促進(jìn)黏膜上皮細(xì)胞向潰瘍部位移行和修復(fù)[11-12]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柚皮苷能明顯提升胃潰瘍大鼠血清及胃黏膜中TFF2的水平，隨著用藥劑量的增加，其作用效果愈明顯，且柚皮苷高劑量組大鼠血清和胃黏膜組織中TFF2水平與對(duì)照組大鼠血清和胃黏膜組織中TFF2水平無(wú)顯著差異。胃潰瘍指數(shù)也提示，柚皮苷對(duì)胃潰瘍的修復(fù)與愈合具有明顯促進(jìn)作用，這表明柚皮苷對(duì)胃潰瘍的保護(hù)作用與提升胃黏膜組織中TFF2的水平具有高度的相關(guān)性，且藥理治療作用與用藥濃度可能存在一定程度的正相關(guān)性。

本實(shí)驗(yàn)顯示，蘭索拉唑組TFF2的表達(dá)偏低，這可能與蘭索拉唑的藥理作用機(jī)制有關(guān)。蘭索拉唑?qū)俚诙|(zhì)子泵抑制劑，具有明顯的抑制胃酸分泌作用。其主要作用于胃壁細(xì)胞的H+-K+-ATP酶，能使H+質(zhì)子泵的巰基氧化而失去活性，阻斷壁細(xì)胞的H+分泌入胃中，致使胃液中胃酸減少，從而達(dá)到治療胃潰瘍的作用。本實(shí)驗(yàn)采用乙酸造模的方法與刺激胃酸分泌機(jī)制相似，所以蘭索拉唑的治療效果比較明顯。但TFF2的主要作用在于促進(jìn)胃黏液糖蛋白分泌與合成，促進(jìn)胃黏膜的修復(fù)與愈合，并不能直接抑制胃酸分泌[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，蘭索拉唑促進(jìn)胃黏膜TFF2表達(dá)的作用不明顯。

胃潰瘍屬中醫(yī)學(xué)胃痛、胃脘痛范疇，多因外感寒邪、飲食所傷、情志不暢和脾胃素虛等引發(fā)，從而導(dǎo)致氣滯、寒凝、熱郁、濕阻、血瘀等病理變化，影響胃失和降，不通則痛。治療上以理氣和胃止痛為主。作為柚皮苷的主要來(lái)源，陳皮、枳實(shí)、青皮等中藥均具有較強(qiáng)的理氣和胃止痛作用，是中醫(yī)藥治療胃痛的常用處方組成藥物。這也可能是柚皮苷具有抗胃潰瘍作用的內(nèi)在聯(lián)系。

綜上所述，柚皮苷具有明顯的促進(jìn)胃潰瘍愈合作用，且治療效果與蘭索拉唑無(wú)明顯差異。柚皮苷的作用機(jī)制可能是通過(guò)刺激胃黏膜細(xì)胞，促進(jìn)黏膜保護(hù)因子TFF2分泌，提高TFF2水平，加快胃黏膜的增殖與修復(fù)，從而達(dá)到保護(hù)胃黏膜，預(yù)防和治療胃潰瘍的作用。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.32.031

重慶市教育委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目(KJ131805)。 作者簡(jiǎn)介：秦建設(shè)(1978-)，副教授，碩士，主要從事中醫(yī)藥治療脾胃疾病研究。△

E-mail:zhengbo20042008@163.com。

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2016-08-13)