結核特異性細胞免疫反應試驗在結核病中的診斷價值

張曉梅，張興旺，葉　華，馬華瑜，王　平，李德紅，魏蓮花

(甘肅省人民醫院檢驗中心免疫室，蘭州 730000)

·臨床研究·

結核特異性細胞免疫反應試驗在結核病中的診斷價值

張曉梅，張興旺，葉華，馬華瑜，王平，李德紅，魏蓮花△

(甘肅省人民醫院檢驗中心免疫室，蘭州 730000)

摘要:目的通過對結核特異性細胞免疫反應(TB-IGRA)試驗結果進行分析，探討TB-IGRA在結核病診斷及鑒別診斷中的意義。方法收集甘肅省人民醫院2014年1～12月住院的肺結核、疑似肺結核及肺外結核患者共1 366例，采用TB-IGRA檢測結核分枝桿菌相關γ-干擾素，進行敏感度和特異性指標分析，與涂片鏡檢、結核抗體檢測及結核分枝桿菌核酸檢測方法進行比較。結果TB-IGRA在肺結核及肺外結核病中的陽性檢出率高達85.40% 及86.20%，同時與涂片鏡檢、結核抗體檢測及結核分枝桿菌核酸檢測比較,其陽性率分別為 82.90%、36.60%、11.00%和31.70%。TB-IGRA檢測陽性率顯著高于另 3 種方法。結論TB-IGRA是檢測結核分枝桿菌的快速敏感指標，且優于傳統方法，在臨床結核病診斷中有重要價值。

關鍵詞:結核特異性細胞免疫反應；結核性疾病；敏感度；特異性

結核病是嚴重危害人類健康的呼吸道傳染病,被列為中國重大傳染病之一。我國是全球22個結核病流行嚴重的國家之一。雖然如今結核病治愈率接近100%，但仍然是威脅公共衛生的一個重大問題。快速準確地診斷結核病成為備受關注的問題。結核特異性細胞免疫反應(TB-IGRA)被證實在結核分枝桿菌感染中有較好的敏感度和特異性，在歐美國家已經成為一種常用的結核檢測方法[1-5]。本研究通過對本院收集的1 366例患者的TB-IGRA試驗結果進行分析，探討TB-IGRA在結核病診斷中的價值，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料收集本院2014年1～12月住院的肺結核、疑似肺結核及肺外結核患者共1 366例。結核病的診斷均參考中華醫學會《臨床診療指南》結核病分冊,并結合病史、臨床表現、影像學、細菌學、病理檢查等方法確診,并經抗結核治療效果支持臨床診斷。疑似病例選取門診收入院的尚未開始抗結核治療,最終診斷不明確或確診非結核病者排除出試驗組。年齡7～87歲，平均48.2歲，男724例，女642例，經統計分析各組年齡及性別構成差異無統計學意義。采用TB-IGRA檢測結核分枝桿菌相關γ-干擾素。并選取82例臨床診斷的肺結核患者，分析TB-IGRA、涂片鏡檢、結核抗體檢測及結核分枝桿菌核酸檢測結果。

1.2儀器與試劑主要儀器為美國雷杜酶標分析儀RT-2100C，恒溫箱37 ℃，結核分枝桿菌 TB-IGRA診斷試劑盒由海口維瑅璦生物研究院提供。

1.3方法

1.3.1清晨空腹采集肝素鈉抗凝全血(≥3 mL)，顛倒混勻，常溫(15～25 ℃)保存，于采血后16 h內送檢進行前處理(抗原刺激)。每份標本取3根3 mL玻璃無添加劑采血管并編號，在對應的管中加入刺激劑，陰性對照管(N)，陽性對照管(P)，測試刺激管(T)，每種培養管分裝1 mL抗凝全血，顛倒混勻后置于37 ℃水浴箱培養22～24 h后，4 000 r/ min離心10 min，收集上清血漿，以ELISA檢測γ-干擾素水平，N<0.5 U/mL，T-N/P-N ≥0.60時判為陽性，否則為陰性；N≥0.5 U/mL，T-N/P-N≥0.85時判為陽性，否則為陰性。

1.3.2結核抗體診斷試劑(TB-DOT)為北京健乃喜生物技術有限公司產品，嚴格按照說明書操作。

1.3.3涂片抗酸染色按照檢驗標準試驗操作規程進行。

1.3.4TB-PCR熒光定量聚合酶鏈反應試劑由達安基因有限公司提供,TB-DNA(PCR)≥103U/mL判斷為陽性，<103U/mL判斷為陰性。

1.4統計學處理采用SPSS17.0統計軟件進行處理，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同類別病例TB-IGRA檢測人數見表1。2014年1～12月住院的肺結核、疑似肺結核及肺外結核患者共1 366例。經統計分析，臨床診斷肺結核及肺外結核與疑似結核病例及非結核病例比較檢出率差異有統計學意義(P<0.05)，臨床診斷肺結核與肺外結核比較檢出率差異無統計學意義(P>0.05)。TB-IGRA檢測在肺結核及肺外結核病例中的檢出率顯著高于疑似結核病例及非結核病例。

表1　　不同類別病例TB-IGRA檢測人數

2.24種方法檢測82例臨床診斷的肺結核患者陽性結果TB-IGRA、涂片鏡檢、結核抗體(膠體金法)及TB-PCR 4種方法檢測82例臨床診斷的肺結核患者陽性結果分別是TB-IGRA68例(82.90%)，涂片鏡檢30例(36.60%)，結核抗體(膠體金法)9例(11.00%)，TB-PCR26例(31.70%)。將TB-IGRA與涂片鏡檢、結核抗體(膠體金法)及TB-PCR進行比較,TB-IGRA檢測陽性率顯著高于另3種方法，差異均有統計學意義(P<0.05)。

3討論

全球目前約有20億人感染結核分枝桿菌,占全世界總人口的近1/3,其中活動性肺結核患者達2 000萬。我國肺結核每年新發患者和患病總人數居世界第2位，我國現有結核桿菌感染者約5億，活動性肺結核患者約500萬，其中涂陽患者約150萬。肺外結核是指結核分枝桿菌感染肺部以外的其他臟器而出現的結核病。國外有資料顯示，肺外結核占結核病的25%～30%，在中國約占結核病的9.7%～11.8%，病死率占總結核病病死率的14.1%～17.6%[6-7]。

本研究結果表明，TB-IGRA檢測在肺結核、肺外結核、疑似結核病例及非結核病病例中檢出率較，高分別為85.40%、86.20%、51.95%，與2005年臺灣大學Wang等[8]報道的TB-IGRA的檢出率87.00%，Kobashi等[9]在日本研究的TB-IGRA在50例確診為肺結核患者中檢出率為86.00%基本相一致，低于在韓國首爾大學Kim等[10]的研究，其報道的TB-IGRA在肺外結核患者中的檢出率為95.00%。

傳統結核診斷方法敏感度低、特異性差，不能區分非結核分枝桿菌的感染，肺外結核標本不易取得，肺結核檢出率低。TB-IGRA敏感度強、特異性高，γ-干擾素在體內的表達明顯早于細菌學證據及典型的影像學表現，可以早期診斷，全血標本易于獲得，操作簡便，30 h即可出報告。本研究通過4種方法比較得出,TB-IGRA與涂片鏡檢、結核抗體(膠體金法)及TB-PCR陽性率分別為:82.90%、36.60%、11.00%和31.70%。TB-IGRA檢測陽性率顯著高于另3種方法,差異均有統計學意義(P<0.05)，由此說明TB-IGRA用于檢測結核分枝桿菌感染優于其他指標。

綜上所述，TB-IGRA檢測可作為結核分枝桿菌感染的常規診斷方法，并且具有較高的敏感度和特異性，優于傳統的檢測方法。但應用時應與臨床癥狀及其他診斷方法，如影像診斷、痰菌涂片、TB-PCR等相結合，同時還要考慮患者的個體免疫狀態，注意免疫低下及免疫功能缺陷合并結核分枝桿菌感染的病例。

參考文獻

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.053

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)11-1568-03

(收稿日期：2016-01-28修回日期：2016-03-25)